目的:已经证明甘氨酸通过NMDA2A受体(NMDA2AR)和甘氨酸受体(GlyR)发挥神经保护作用,但甘氨酸在胞内的神经保护作用却少有研究。本课题首先检测缺血性脑损伤后神经元胞内甘氨酸水平是否降低,探讨给予神经元内甘氨酸补充治疗的必要性和可行性,同时探索甘氨酸在胞内发挥神经保护作用的机制。为甘氨酸治疗中风提供依据。方法:通过高效液相色谱法(HPLC)检测正常以及缺血损伤脑组织中甘氨酸水平。HPLC检测中风体外模型----氧糖剥夺模型中的神经元胞内甘氨酸水平。采用TTC染色法检测补充甘氨酸对缺血损伤体积的影响,MTT和LDH方法检测大鼠原代皮层神经元的活性和死亡。Westernblot检测相关的蛋白质表达。细胞免疫荧光和组织切片免疫荧光染色检测相关蛋白质在原代神经元和大脑中的分布情况。从而探索甘氨酸发挥神经保护作用的机制。结果:1、缺血损伤模型中,缺血以及再灌注时,大脑组织甘氨酸含量升高,神经元内甘氨酸水平降低;体外中风模型中,损伤神经元内的甘氨酸减少;2、氧糖剥夺损伤后给予甘氨酸,神经元的活性增高,死亡率降低;3、大鼠大脑缺血再灌注后给予甘氨酸,大脑缺血面积减少,尼氏体增多;4、氧糖剥夺损伤后的早期,甘氨酸脱氢酶(GLDC)在神经元中表达降低,在大脑缺血再灌注早期,GLDC表达降低;5、甘氨酸对损伤后神经元活性的提高依赖于GLDC;6、抑制p53促进GLDC表达,增强甘氨酸的神经保护作用;7、GLDC表达增高时,外源甘氨酸对神经元促存活作用明显增强。当干GLDC表达时,甘氨酸神经保护作用显著降低。结论:1、缺血损伤后,大脑甘氨酸含量增高,但神经元内甘氨酸降低。即缺血损伤后神经元内缺乏甘氨酸。2、补充甘氨酸降低缺血性脑损伤以及神经元OGD损伤3、甘氨酸对神经元的保护作用依赖于GLDC表达。4、通过抑制p53后,可以提高GLDC表达,从而增强甘氨酸的神经保护作用。