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目的:帕金森病(Parkinson’s disease,PD)是一种常见的神经退行性疾病,以静止性震颤、运动迟缓、肌强直和姿势不稳等症状为主要特征。近年研究表明,基因多态性与散发型帕金森病发病风险密切相关,但不同地域、不同种族间的研究结果尚存在争议,本研究旨在探究LRRK2、APOE、FGF20、SNCA、PARK16、PITX3、BST1、PARKIN S/N、GBK和GBA基因多态性与中国江苏地区散发型帕金森病是否具有相关性,并利用Meta分析方法进一步探究基因多态性与中国帕金森病人群相关性及相关临床症状的关联。此外,本研究采用基质辅助激光解析电离飞行时间质谱法、免疫荧光PCR法和DNA测序三种方法学对部分位点进行基因分型,旨在比较方法学的可靠性和准确性,同时选择更加快捷有效的方法学运用在临床,协助临床诊断帕金森病。方法:1.选取江苏地区171例散发型帕金森病人与94例健康对照者为研究对象,PD组根据发病年龄不同,分为早发型PD组和晚发型PD组。根据性别分为男性PD组和女性PD组。2.采用基质辅助激光解析电离飞行时间质谱法(matrix assisted laser desorption ionization time of flight mass spectrometry,MALDI-TOF MS)对LRRK2(rs34778348、rs2046932、rs33949390)、APOE(rs429358和rs7412)、FGF20(rs591323和rs1721100)、SNCA(rs356219、rs356220、rs894278、rs2736990、rs356182)、PARK16(rs947211、rs823156、rs823128)、PITX3(rs3758549)、BST1(rs4698421)、PARKIN S/N(rs1801474)、GBK(rs1564282)和GBA(rs421016)候选SNP位点进行基因分型,并遴选3个SNP位点同时采用MALDI-TOF MS、荧光免疫PCR法、测序法三种方法分析,对比三种方法准确性。3.应用SPSS统计软件对基因检测相关数据进行处理和统计学分析,探究基因多态性与PD发病风险的关联性。4.采用Meta分析方法进一步探讨LRRK2和GBA基因多态性与中国人群散发型帕金森病及相关临床症状的关联性。结果:1.LRRK2基因rs34778348位点PD组与健康对照组相比,等位基因频率和基因型频率分布均有统计学差异(OR=5.71,P=0.001;OR=5.94,P=0.010)。早发型PD组、晚发型PD组、女性PD组A等位基因频率均明显高于对照组,差异有统计学意义。基因型为AG及AA的PD人群发病年龄较GG型PD人群早发病约5年(P=0.011),且女性PD人群更易发生变异(P=0.019),在男性PD组、起病临床症状、病程等未见显著性差异。2.LRRK2基因rs2046932位点PD组与对照组比较,等位基因和基因型频率分布均有统计学差异(OR=4.11,P=0.005;OR=4.23,P=0.005),早发型PD组、晚发型PD组、女性PD组A等位基因频率明显高于对照组,差异有统计学意义。基因型为AG及AA的PD人群发病年龄较GG型PD人群发病早约6年(P=0.002),女性PD人群更易发生变异。但在男性PD组、病程、起病症状中未见明显差异(P>0.05)。3.GBA基因rs421016位点病例组与对照组比较,等位基因频率和基因型频率均有统计学意义(P=0.010;P=0.03),早发型PD组A等位基因与对照组相比具有统计学差异(P=0.018),但在性别、晚发型PD组、病程、起病症状亚组分析中未见统计学差异(P>0.05)。4.PARK16基因(rs823128位点)在男性PD组中同对照组相比基因型频率存在显著性差异(AG+GG/AA:OR=0.44,95%CI 0.21-0.90,P=0.024)。但在其他亚组分析中未见统计学分析。5.LRRK2基因(rs33949390)、APOE基因(rs591323)、SNCA基因(rs1721100、rs356219、rs356220、rs894278、rs2736990、rs356182)、PARK16(rs947211和rs823156)、PITX3(rs3758549)、BST1(rs4698421)、PARKIN S/N(rs1801474)和GBK(rs1564282)病例组和对照组相比,基因型和等位基因频率均无统计学差异(P>0.05),进一步性别、年龄亚组分析中均未见统计学差异(P>0.05)。6.质谱法、荧光PCR法和测序法分别检测SNP位点结果显示,PCR法和质谱法与基因测序法比较,基因分型结果完全一致,且三种方法准确度一致的情况下,质谱法更经济且高通量。7.Meta分析结果显示,共纳入研究44篇,包括27155例帕金森患者和31599例健康对照。(1)LRRK2基因突变Meta分析结果显示,LRRK2基因多态性与中国人群PD易感性显著相关(OR=2.02,95%CL,1.76-2.32,P=0.000)。LRRK2基因SNP位点R1628P、G2385R、A419V多态性与中国人群PD风险的增加显著相关(P<0.05),P755L多态性与PD发病风险无明显相关性(P=0.704)。临床症状方面,携带LRRK2突变的PD患者H-Y评分略低于非携带者,MMSE评分略高于非携带者(P=0.009;P=0.001);UPDRS-Ⅰ、UPDRS-Ⅱ、UPDRS-Ⅲ评分携带组均低于非携带组(P=0.005;P=0.011;P=0.005),差异有统计学意义。发病起始症状无明显统计学差异。(2)GBA基因突变Meta分析结果显示,GBA基因多态性与中国人群PD易感性显著相关(OR=6.41,95%CL,3.60-11.40,P=0.000),GBA基因SNP位点L444P(P=0.000)多态性与中国人群PD风险的增加显著相关,N370S和R120W多态性在PD患者与对照组中无明显统计学差异(P>0.05)。临床症状方面,帕金森病H-Y评分和UPDRS评分在GBA基因突变携带组与非携带组之间无显著性差异(P>0.05)。结论:1.LRRK2基因rs34778348位点是散发型PD发病的危险因素之一,其等位基因A增加了PD的发病风险,携带A等位基因的患者发病年龄比其他PD患者早约5年。这种差异在女性PD人群中更显著,携带A等位基因的女性PD人群较其他女性PD患者早发病约5.53年。2.LRRK2基因rs2046932位点是散发型PD发病的危险因素之一,其等位基因A增加了PD的发病风险,携带A等位基因的患者发病年龄比其他PD患者早约6年,女性PD人群更易发生变异,携带A等位基因的女性PD人群较其他女性PD患者早发病约6.19年。本研究发现了rs2046932位点与帕金森病发病年龄及性别相关。3.GBA基因rs421016位点等位基因G可增加PD发病风险,该位点是PD发病的危险因素之一。PARK16基因rs823128位点等位基因G可能是帕金森病的保护基因。4.LRRK2基因(rs33949390)、APOE基因(rs429358和rs7412位点)、FGF20(rs591323和rs1721100)、SNCA基因(rs356219、rs356220、rs894278、rs2736990和rs356182)、PARK16基因(rs947211、rs823156)、PITX3基因(rs3758549)、BST1基因(rs4698421)、GBK基因(rs1564282)、PARKIN S/N167(rs1801474)与PD发病未见明显相关性。5.PCR法和质谱法检测SNP位点与基因测序比较结果完全一致。6.LRRK2,GBA基因多态性显著增加了中国人群散发型帕金森病的发病风险,且携带LRRK2突变的PD患者与非携带患者相比具有较低的H-Y评分、UPDRS评分及较高的MMSE评分,起始症状无明显差异;携带GBA突变的PD患者与非携带患者相比在H-Y评分、UPDRS评分方面无相关性。