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本课题首先研究索拉菲尼(SO)与萝卜硫素(SF)单独及联合用药对肝肿瘤细胞和肿瘤干细胞的治疗效果,然后制备载SO和SF的脂质双分子层的介孔二氧化硅纳米粒(LMSN),进一步探讨载SO和SF的LMSN单独及联合用药对肝肿瘤细胞HepG2的治疗效果。我们首先借助于高效液相色谱技术建立了SO和SF含量测定的方法。实验结果显示,SO浓度在12.5-400 μg-mL-1范围内与样品峰面积A呈良好相关性(r=0.9999),直线回归方程：A=10061C-203.8。实验结果显示,SF浓度在3.125～200μg-mL-1范围内与样品峰面积A呈良好相关性(r=0.9999),直线回归方程：A=31321C+44464。结果显示,SO与SF方法的线性、精密度、回收率、专属性均符合要求,可以用于药物的含量检测。在温和碱性条件下,以CTAB阳离子表面活性剂作为模板剂,TEOS作为无机硅源,在80℃介孔合成温度条件下,制备二维结构相的MCM-41型MSN。使用硅烷偶联剂AEPTMS对MSN进行表面氨基化修饰,制备得到的Ap-MSN分散性显著得到改善,孔径增大至9.97nm,孔容积为0.724cm3/g,并增加了对SF的载药量。采用乙醇注入法,以DOPC, DOPE, DSPE-PEG2000,胆固醇为油相,制备了粒径均一、在透射电镜(TEM)下清晰可见核壳结构的的脂质体(Liposome),然后将Liposome与载药MSN共孵育,成功制备了具有脂质双分子层的载药纳米粒(]LMSN)。扫描电镜(SEM)下观察MSN形貌,大小圆整,粒径在90～100nm之间。MSN的TEM图谱表示介孔结构有序、均一是典型的二维结构相MCM-41型介孔分子筛结构。采用CCK-8法检测药物对细胞活性,结果表明SO和SF对HepG2细胞生长的抑制效应呈浓度依赖性。通过比较SO与SF在7种不同摩尔比例,每个比例筛选6种不同浓度,利用协同指数CI值(CI>1.1,拮抗；0.9<CI<1.1,相加；CI<0.9,协同),筛选出对肝癌细胞HepG2的协同、拮抗及相加比例分别为5：1、1：1、10：1。通过平板克隆形成实验对不同比例细胞克隆形成情况进行考察,结果表明SO与SF在协同比例5：1,SO与SF浓度分别是4.0.8 μmol/L时其克隆形成数(14.7±3.08)明显低于拮抗比例1：1,SO与SF浓度分别是4、4 μmol/L时的克隆形成数(31.33±5.16),P<0.01；细胞凋亡实验结果显示,SO与SF主要抑制HepG2细胞早期凋亡,在SO与SF在协同比例5：1时,SO与SF浓度分别是8、1.6μmol/L时其早期凋亡率(18.9±3.87)%明显高于拮抗比例1：1,两药浓度分别是8、8μmol/L时的早期凋亡率(4.76±0.06)%。选用人肝肿瘤细胞株HepG2,用无血清培养基悬浮培养得到HepG2-TS。以CD133作为肝肿瘤干细胞特异性表面标记物,经流式细胞仪证实肝肿瘤微球体高表达CD133。采用CCK-8法检测SO与SF对HepG2-TS的细胞杀伤效果,结果表明：在相同浓度下,SO与SF对HepG2-TS比对HepG2细胞系的IC50低,实验结果表明,相比HepG2细胞系而言,HepG2-TS对SO与SF更为敏感；微球体成球率实验表明：经SO与SF处理后,微球体成球率均比空白组下降,而紫杉醇对照组的微球体成球率高于空白组,上述实验结果表明：SO与SF对肝肿瘤干细胞杀伤作用更强。我们进一步计算不同比例不同浓度下SO与SF对HepG2-TS的协同指数CI值,结果表明：SO与SF比例为20：1时表现为协同作用(CI<0.9),5：1时表现为相加作用(0.9<CI<1.1)。在载药纳米粒体外细胞毒性实验中,空白材料MSN与LMSN在实验浓度范围内对HepG2细胞均无细胞毒性。SF/LMSN比SF的细胞杀伤作用更强,SO/LMSN和SO的细胞杀伤作用相比没有显著性差异。在SO/LMSN:SF/LMSN摩尔比为5：1时比单独使用SO/LMSN或SF/LMSN具有更强的杀伤效果。本课题采用模板法成功制备MSN,其粒径均一、表面形貌圆整、具有清晰有序的二维孔道结构。采用]HPLC法分析MSN的载药量及包封率,结果表明以MSN为纳米载药系统可显著提高对疏水药物SO的包封率和载药量；氨基化改性后可提高SF药物的载药量及包封率。课题首次比较SO与SF在不同摩尔比时对HepG2细胞系及HepG2-TS的杀伤效果,实验结果表明当SO与SF摩尔比为5：1时对HepG2细胞系具有协同治疗效果,对HepG2-TS具有相加治疗效果,目前还未见相关报道。SO/LMSN与SF/LMSN在5：1比例下对HepG2细胞的杀伤比单独SO/LMSN与SF/LMSN更强。该研究证实SO与SF均能有效杀伤肝肿瘤干细胞,载SO和SF的LMSN亦能有效杀伤肝肿瘤细胞,该研究可能为肝肿瘤治疗提供一种有效的治疗方法。