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研究背景：毛囊的体外保存对于临床毛发移植具有重要意义,很多学者利用低温以及玻璃化深低温冻存等各种不同方法体外保存人完整毛囊,但效果均不理想,研发更有效的玻璃化冷冻保护剂是解决问题的关键。另外,毛囊再生与皮肤微环境具有复杂而密切的联系,组织工程皮肤在一定程度上模拟了毛囊生长环境,本研究首次尝试利用组织工程技术在体外常温保存毛囊。目的：1.添加促进毛囊再生的相关生长因子,优化玻璃化冷冻保护剂。2.组织工程技术模拟毛囊的生长环境,探讨常温保存毛囊方法。方法：1.将临床取得的健康头皮分离为单个无损伤毛囊后,随机分为体外培养组、慢速冻存组、玻璃化冻存组和细胞因子玻璃化冻存组。分别冻存24小时,72小时,1个月,6个月。通过长度测量、HE染色和免疫荧光染色检测毛囊活性。2.将分离的毛囊单位插入由成纤维细胞和Ⅰ型鼠尾胶原构建的组织工程真皮后,分3次铺入角质形成细胞,浸没培养1周、气-液界面培养3周后,通过镜下观察、HE染色和免疫组化检测组织工程皮肤和毛囊的生长状态。结果：1.经过不同时间冻存后复温,细胞因子HGF玻璃化冻存组毛囊5天内生长率和生长长度高于其他冻存组,与体外培养组无统计学差异；HE染色结果显示该组毛囊细胞数量多于其他冻存组,且组织结构更完整；免疫荧光染色显示该组毛囊的干细胞存活数量明显多于慢速冻存组和未加因子玻璃化冻存组。2.经过4周体外培养,植入毛囊的组织工程皮肤镜下观察可见毛囊和皮脂腺等皮肤附属器存在,毛囊形态维持21天未见毛乳头损坏,该时间明显长于体外悬浮培养。HE染色显示植入毛囊的组织工程皮肤表面可见分层角化的表皮形成,免疫组化染色显示其分化标志物Keratin4和Keratin10表达阳性,表皮真皮连接处基底膜特异性标志物Laminin和Ⅳ型胶原呈连续表达。结论：加入细胞因子HGF优化玻璃化冷冻保护剂的玻璃化冻存技术可长期有效保存毛囊。复合毛囊单位的组织工程皮肤可以延长常温体外毛囊生存时间,并促进组织工程皮肤表皮组织的分化和成熟。这两种方法均为临床毛发移植手术方式改进提供了基础,为毛囊的体外培养和组织工程皮肤的构建提供了新的思路和方法。