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目的：设计可特异性识别并靶向作用于HBV增强子I（EnhⅠ）的人工转录因子（Artificial Transcription Factor，ATF），通过ATF靶向作用于HBV EnhⅠ来抑制HBV DNA的复制与表达，为防治HBV提供新的技术方法和实验依据。 方法：1.通过基因工程和生物信息学方法分析、对比 HBV EnhⅠ序列后确定最佳靶序列。设计能特异性结合HBV EnhⅠ最佳靶序列的ATF并构建其真核表达质粒载体pcDNA3.1-ATF；2.将真核表达质粒载体转染 HepG2细胞，通过酶切鉴定重组质粒的正确性,使用免疫荧光和Western-blot方法检测 ATF在真核细胞内的表达情况；3.将真核表达质粒转染 HepG2.2.15细胞，使用CCK-8检测ATF对细胞增殖的影响，使用 ELISA、qRT-PCR方法检测 ATF对 HBV DNA复制与表达的抑制作用。 结果：1.将pcDNA3.1-ATF转染 HepG2细胞后，使用免疫荧光和Western-blot检测ATF蛋白能够正常表达。2.将真核表达质粒转染HepG2.2.15细胞后，通过CCK-8检测说明 ATF对细胞增殖生长无明显的毒性作用, ELISA检测显示细胞中 HBeAg分泌量明显减少，荧光定量PCR检测显示细胞内HBV mRNA含量减少。实时荧光定量PCR检测显示细胞内HBV DNA拷贝数明显下降。 结论：人工设计的可特异性结合于HBV EnhⅠ的ATF在真核细胞内正常表达，在HepG2.2.15细胞中可以有效抑制HBV DNA复制与表达，对细胞生长无明显影响。