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背景
心脏血液灌注减少，导致心脏供氧减少，心肌能量代谢异常，不能支持心脏正常工作的病理状态，形成心肌缺血。减少心肌缺血缺氧后氧自由基含量、炎症因子释放及缺血引起的心肌细胞凋亡是治疗心肌缺血的一种有效方案。四逆汤最早记载于《伤寒论》，是回阳救逆的基础方，主要用于治疗心肌梗死、心力衰竭等急症。但其具体作用机制尚不明确。课题组在前期研究了四逆汤及其拆方，即四逆汤、附子干姜、附子甘草、干姜甘草、附子、干姜、甘草，探索不同组方对大鼠H9C2心肌细胞缺血缺氧(Ischemia hypoxia，IH)损伤的保护作用，结果表明四逆汤、附子干姜、附子甘草、附子组对大鼠H9C2心肌细胞缺血缺氧损伤具有保护作用。因此，本研究以四逆汤、附子干姜、附子甘草、附子为干预药物，探究其对大鼠H9C2心肌细胞缺血缺氧损伤及异丙肾上腺素(Isoprenaline，ISO)诱导的急性心肌缺血的保护作用机制。揭示其内在药效作用机制，以筛选出复方中的核心药对或单味药，为临床应用及新药开发提供新的切入点，同时为安全有效防治急性心肌缺血药物的研究提供理论依据。
目的
1.研究四逆汤及其拆方对H9C2心肌细胞缺血缺氧(IH)损伤的保护作用。
2.在细胞研究的基础上研究四逆汤及拆方水煎液对急性心肌缺血(acutemyocardial ischemia，AMI )大鼠的的心肌保护作用机制。
3.探索原方与拆方之间对心肌缺血保护效果的的差异，及疗效显著程度顺序，验证四逆汤用药的精准和科学性。
方法
1.细胞缺血缺氧模型建立：试验前期筛选最适宜的缺血缺氧时间，使用厌氧袋建立缺氧环境，及给药安全范围，观察四逆汤及各拆方对缺血缺氧H9C2心肌细胞中LDH、AST、MDA、SOD活性，流式细胞仪检测细凋亡，MTT检测细胞活力；
2.皮下注射异丙肾上腺素建立心肌缺血动物模型，以心电图S-T段抬高检验模型成功，筛选在细胞实验中对IH心肌细胞保护作用显著的四逆汤、附子干姜、附子甘草、附子来干预心肌缺血大鼠，观察其对该模型大鼠血浆中心肌酶(LDH、AST)；心肌肌钙蛋白(cTnI)；炎性因子(TNF-α、IL-6)；氧化应激(心肌组织中的GSH-Px)；TUNEL检测大鼠心肌细胞凋亡；免疫组化检测心肌组织中caspase-9、Bcl-2和Bax表达。
结果
1四逆汤及拆方水煎液能不同程度抑制缺血缺氧心肌细胞的凋亡，减少细胞中AST、LDH、MDA的含量，同时还能使SOD的含量升高，其中四逆汤、附子干姜、干姜甘草中剂量对心肌酶含量的影响显著，高剂量附子对缺血缺氧H9C2心肌细胞保护作用不显著。流式细胞仪检测细胞凋亡结果显示四逆汤及拆方水煎液能减少缺血缺氧所致心肌细胞的损伤，发挥保护作用。
2四逆汤及拆方水煎液能减少ISO所致的心肌损伤，减少大鼠血清中炎症因子IL-6、肿瘤坏死因子TNF-α的含量；给予四逆汤及拆方水煎液能心肌中抑制AST、LDH、MDA、cTnI的释放，降低Bax、Caspase-9蛋白的表达水平，上调Bcl-2蛋白的表达水平；HE染色结果提示四逆汤及水煎液能不同程度改善ISO诱导的心肌的病理损伤；TUNEL检测结果提示其能有效减少心肌细胞的凋亡，发挥对心肌的保护作用。
结论
1.四逆汤及拆方水煎液能改善缺血缺氧H9C2心肌细胞损伤，同模型组相比给药组能不同程度增加细胞的存活率，抑制细胞的凋亡，减少AST、LDH、MDA的含量，使SOD的含量增加。
2.四逆汤及拆方水煎液对AMI心肌发挥保护作用可能是通过以下三个途径：①减轻心肌组织炎症因子的浸润②降低脂质的过氧化损伤③下调促凋亡蛋白的表达，减少细胞凋亡，使心肌组织的病理损伤得到改善。
心脏血液灌注减少，导致心脏供氧减少，心肌能量代谢异常，不能支持心脏正常工作的病理状态，形成心肌缺血。减少心肌缺血缺氧后氧自由基含量、炎症因子释放及缺血引起的心肌细胞凋亡是治疗心肌缺血的一种有效方案。四逆汤最早记载于《伤寒论》，是回阳救逆的基础方，主要用于治疗心肌梗死、心力衰竭等急症。但其具体作用机制尚不明确。课题组在前期研究了四逆汤及其拆方，即四逆汤、附子干姜、附子甘草、干姜甘草、附子、干姜、甘草，探索不同组方对大鼠H9C2心肌细胞缺血缺氧(Ischemia hypoxia，IH)损伤的保护作用，结果表明四逆汤、附子干姜、附子甘草、附子组对大鼠H9C2心肌细胞缺血缺氧损伤具有保护作用。因此，本研究以四逆汤、附子干姜、附子甘草、附子为干预药物，探究其对大鼠H9C2心肌细胞缺血缺氧损伤及异丙肾上腺素(Isoprenaline，ISO)诱导的急性心肌缺血的保护作用机制。揭示其内在药效作用机制，以筛选出复方中的核心药对或单味药，为临床应用及新药开发提供新的切入点，同时为安全有效防治急性心肌缺血药物的研究提供理论依据。
目的
1.研究四逆汤及其拆方对H9C2心肌细胞缺血缺氧(IH)损伤的保护作用。
2.在细胞研究的基础上研究四逆汤及拆方水煎液对急性心肌缺血(acutemyocardial ischemia，AMI )大鼠的的心肌保护作用机制。
3.探索原方与拆方之间对心肌缺血保护效果的的差异，及疗效显著程度顺序，验证四逆汤用药的精准和科学性。
方法
1.细胞缺血缺氧模型建立：试验前期筛选最适宜的缺血缺氧时间，使用厌氧袋建立缺氧环境，及给药安全范围，观察四逆汤及各拆方对缺血缺氧H9C2心肌细胞中LDH、AST、MDA、SOD活性，流式细胞仪检测细凋亡，MTT检测细胞活力；
2.皮下注射异丙肾上腺素建立心肌缺血动物模型，以心电图S-T段抬高检验模型成功，筛选在细胞实验中对IH心肌细胞保护作用显著的四逆汤、附子干姜、附子甘草、附子来干预心肌缺血大鼠，观察其对该模型大鼠血浆中心肌酶(LDH、AST)；心肌肌钙蛋白(cTnI)；炎性因子(TNF-α、IL-6)；氧化应激(心肌组织中的GSH-Px)；TUNEL检测大鼠心肌细胞凋亡；免疫组化检测心肌组织中caspase-9、Bcl-2和Bax表达。
结果
1四逆汤及拆方水煎液能不同程度抑制缺血缺氧心肌细胞的凋亡，减少细胞中AST、LDH、MDA的含量，同时还能使SOD的含量升高，其中四逆汤、附子干姜、干姜甘草中剂量对心肌酶含量的影响显著，高剂量附子对缺血缺氧H9C2心肌细胞保护作用不显著。流式细胞仪检测细胞凋亡结果显示四逆汤及拆方水煎液能减少缺血缺氧所致心肌细胞的损伤，发挥保护作用。
2四逆汤及拆方水煎液能减少ISO所致的心肌损伤，减少大鼠血清中炎症因子IL-6、肿瘤坏死因子TNF-α的含量；给予四逆汤及拆方水煎液能心肌中抑制AST、LDH、MDA、cTnI的释放，降低Bax、Caspase-9蛋白的表达水平，上调Bcl-2蛋白的表达水平；HE染色结果提示四逆汤及水煎液能不同程度改善ISO诱导的心肌的病理损伤；TUNEL检测结果提示其能有效减少心肌细胞的凋亡，发挥对心肌的保护作用。
结论
1.四逆汤及拆方水煎液能改善缺血缺氧H9C2心肌细胞损伤，同模型组相比给药组能不同程度增加细胞的存活率，抑制细胞的凋亡，减少AST、LDH、MDA的含量，使SOD的含量增加。
2.四逆汤及拆方水煎液对AMI心肌发挥保护作用可能是通过以下三个途径：①减轻心肌组织炎症因子的浸润②降低脂质的过氧化损伤③下调促凋亡蛋白的表达，减少细胞凋亡，使心肌组织的病理损伤得到改善。