TLR4介导的BV2细胞抗HCV固有免疫应答机制初步研究

来源 :宁夏医科大学 | 被引量 : 0次 | 上传用户:wsb398322830
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目的通过观察HCV刺激后小鼠小胶质细胞(BV2细胞)TLR4表达变化及其下游细胞因子IFN-α、IFN-β、IL-6、IL-12分泌变化,进而分析两者变化的相关性,初步探讨TLR4是否介导参与中枢神经系统(CNS)抗HCV固有免疫应答及其可能机制。方法用含20%HCV阳性血清的培养液刺激BV2细胞,为HCV实验组,并设置正常血清组和空白对照组。应用实时荧光定量PCR(RT-qPCR)方法检测刺激6h、12h、18h、24h后TLR4mRNA的相对表达;应用流式细胞术(FCM)、酶联免疫吸附法(ELISA)分别检测刺激24h后TLR4蛋白及IFN-α、IFN-β、IL-6、IL-12表达水平;通过观察TLR4阻断后各组细胞IFN-α、IFN-β、IL-6、IL-12分泌变化分析两者的相关性。采用单因素方差分析进行多组均数的比较,P<0.05为差异具有统计学意义。结果在BV2细胞中有TLR4mRNA和TLR4蛋白的表达;HCV实验组TLR4mRNA和TLR4蛋白均高于正常血清组及空白对照组,差异有统计学意义(P<0.01),且HCV实验组TLR4mRNA表达24h内呈递增趋势;HCV实验组IFN-α、IFN-β、IL-6、IL-12分泌明显高于正常血清组及空白对照组,差异有统计学意义(P<0.01);HCV实验组TLR4阻断后IFN-α、IFN-β、IL-6、IL-12分泌明显减少,差异有统计学意义(P<0.01),正常血清组和空白对照组阻断TLR4前后无明显变化(P>0.05)。结论HCV阳性血清刺激可引起体外培养的BV2细胞TLR4表达上调,激活细胞因子IFN-α、IFN-β、IL-6、IL-12等分泌发挥抗病毒作用,因此TLR4可能介导参与了CNS抗HCV固有免疫应答过程。
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