冬青属植物ISSR分子标记及枸骨组织培养体系的建立

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中国是冬青属植物资源大国,但冬青属植物资源在观赏方面的开发利用仍处于起步阶段,因此开展分子标记辅助杂交亲本选择,促进园艺品种的选育,以加快冬青属资源的开发利用,变得越来越重要。利用ISSR分子标记对36种冬青属植物的种间关系进行了研究,从100条引物中筛选出12条能扩增出清晰带型并具多态性的引物,共扩增出235条DNA片段,分子量主要集中在400~1 500 bp之间,其中232条片段呈多态性,多态率为98.7%,平均每条引物扩增出19.6条DNA片段;依据扩增结果用UPMGA类平均聚类法进行遗传相似系数分析并构建了系统树。通过聚类分析,发现36个冬青属植物的分子标记分类结果与前人的形态学分类有很大程度的相同:36种冬青属植物在遗传相似系数0.64处明显聚为两大类,即落叶类和常绿类。落叶类包括大果冬青、梅叶冬青、满树星和小果冬青,其中大果冬青与梅叶冬青亲缘关系最近;常绿类包括其余的32个种,在遗传相似系数0.66处,这些种又分为两大组。一组包括枸骨、‘金心’叶阿尔塔冬青及枸骨叶冬青等6个种,另一组包括美国冬青、南非冬青和铁冬青在内的26个种。初步证明了利用ISSR分子标记对冬青属植物进行系统进化和亲缘关系分析的可行性。枸骨以种胚外植体,研究了各种激素对该植物离体培养的影响。通过对比试验,初步确定了适宜于枸骨组织培养与快速繁殖各个阶段的培养基,有助于该植物的推广。结果表明:适宜种胚萌发培养基为1/2MS+GA3 1.0 mg·L-1,壮苗培养基为MS+BA 1.5 mg·L-1+NAA 0.5 mg·L-1;不定芽诱导培养基的最佳培养基为MS+BA 2.0 mg·L-1+NAA 0.1 mg.L-1;较好增殖与继代培养基为MS+BA 3.0 mg·L-1+KT 0.5 mg.L-1+IBA 0.5 mg·L-1;生根适宜培养基为1/2MS+IBA 0.2 mg·L-1+NAA 0.2 mg·L-1
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