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目的:总结分析汪受传教授从“热郁痰瘀”治疗儿童病毒性肺炎的经验;探究“开肺化痰解毒”法治疗儿童病毒性肺炎的临床有效性和安全性;探究清肺口服液治疗RSV肺炎的活性成分和潜在作用靶点;从“代谢-免疫”角度揭示清肺口服液治疗RSV肺炎的疗效机制。方法:系统评价与数据挖掘研究:中英文期刊数据库检索“开肺化痰解毒”法治疗儿童病毒性肺炎的临床RCT研究,Risk-of-bias工具对纳入文献进行质量评价;Review Manager 5.3软件对纳入数据进行Meta分析;Microsoft Excel软件对纳入中药进行频数统计;IBM SPSS Statistics软件对纳入药物进行关联规则分析;Origin Pro软件对纳入中药进行分层聚类分析。网络药理学与分子对接研究:TCMSP和BATMAN-TCM数据库检索清肺口服液有效成分及其靶点,GeneCards和OMIM数据库检索RSV肺炎疾病靶点,获取核心靶点后采用STRING、Cytoscape软件构建“药物-成分-疾病-靶点”和“蛋白质互作”网络图,并进行GO和KEGG分析。临床试验研究:根据纳入和排除标准搜集RSV肺炎(痰热闭肺证)患儿和健康儿童病例,采集血浆样本后基于UltiMate 3000型超高效液相色谱联合质谱(UPLC-MS/MS)技术,通过标准品比对靶标定量长链脂肪酸含量。动物实验研究:以6~8周龄的BALB/c雌性小鼠为研究对象,分为正常组,模型组,清肺口服液低剂量组,清肺口服液中剂量组,清肺口服液高剂量组,激动剂组,激动剂治疗组。RSV病毒滴鼻建立感染模型,SC-79腹腔注射建立蛋白激酶B(Akt)激动模型,连续给药4天后麻醉下处死小鼠,采集血浆及肺组织样本。UPLC-MS/MS技术检测小鼠血浆及肺组织脂质代谢,通过标准品比对靶标定量小鼠肺组织长链脂肪酸含量;采用HE染色观察小鼠肺组织病理表现;采用实时定量PCR技术,检测小鼠肺组织细胞因子(IL-1β、IL-6、TNF-α、IFN-γ、IL-10、Arg-1、iNOS)和脂肪酸代谢酶(FASN、ACLY、Acaca、CPT1A、PPARα、Acox1)转录水平;采用蛋白免疫印迹法检测小鼠肺组织磷酸化蛋白激酶B(p-Akt)、ATP柠檬酸裂解酶(ACLY)、过氧化物酶体增殖物激活受体α(PPARα)蛋白表达量;采用流式细胞术检测小鼠肺组织M1型巨噬细胞、M2型巨噬细胞数量和比例(M1/M2);采用免疫组化检测小鼠肺组织M1型巨噬细胞胞特异性分泌蛋白iNOS和M2型巨噬细胞特异性分泌蛋白Arg-1表达量。结果:(1)通过大样本临床RCT研究,我们发现“开肺化痰解毒”法能够有效缩短病毒性肺炎患儿发热、咳嗽、喘息及肺部啰音消退时间,临床总有效率优于单纯西药治疗对照组,且安全性良好。(2)“开肺化痰解毒”法所用中药大部分性属辛、苦,味属寒,归肺、心经。“麻黄杏仁甘草石膏汤”为该法治疗儿童病毒性肺炎的基础用方,且清肺口服液组方为核心聚类方之一。(3)网络药理学和分子对接研究表明,清肺口服液中有效成分木犀草素、槲皮素、山奈酚、柚皮素均能与Akt靶点良好对接。PI3k/Akt信号通路在KEGG富集中最具显著性差异。(4)临床血浆样本检测到长链脂肪酸FA 12:0、FA 13:0、FA 14:0、FA 14:1、FA 15:0、FA 15:1、FA 19:1、FA 20:2、FA 20:4、FA 21:1、FA 22:0、FA 22:1、FA 22:2、FA 24:1、FA 24:2、FA 27:0在RSV肺炎患儿(痰热闭肺证)血浆中表达上调(FDR<0.05,FC>1.2);RSV感染小鼠血浆中也检测到长链脂肪酸FA 14:1、FA 16:3、FA 17:0、FA 20:4、FA 20:5;O、FA 21:5;O、FA 22:4;O、FA 22:5、FA 22:5;O、FA 22:6;O 表达上调(FDR<0.05,FC>1.2)。因此肉豆蔻烯酸(FA 14:1)和花生四烯酸(FA 20:4)在RSV肺炎患儿和RSV感染小鼠的血浆样本中改变趋势一致。(5)RSV感染小鼠肺组织定量检测出长链脂肪酸FA 14:0、FA 16:0、FA 16:1、FA 17:0、FA 17:1、FA 20:1、FA 20:2、FA 22:1、FA 22:2、FA 24:1 在模型组表达上调,清肺口服液中剂量干预后表达下调。(6)作为调控脂肪酸代谢的关键信号分子,p-Akt蛋白在模型组表达升高,给药组降低,伴随其下游脂肪酸合成酶ACLY在模型组表达升高,给药组降低。相反,下游脂肪酸分解酶PPARα在模型组表达降低,给药组升高。提示清肺口服药通过Akt信号通路抑制长链脂肪酸合成、促进长链脂肪酸分解,引发脂肪酸代谢重构。(7)流式细胞术检测发现RSV感染小鼠肺组织致炎型巨噬细胞(M1)数量增加,同时抗炎型巨噬细胞(M2)数量减少,清肺口服液中剂量干预后M1/M2比值降低,伴随肺部炎症好转。因此,清肺口服液引发的脂肪酸代谢重构进一步诱导了M1型向M2型巨噬细胞极化。(8)Akt激动剂SC-79作用后,清肺口服液对脂肪酸代谢酶的调控作用减弱,伴随巨噬细胞M1/M2极化效应降低,肺部炎症未见明显缓解。由此说明,清肺口服液通过Akt信号通路调节了脂肪酸代谢重构诱导的巨噬细胞M1/M2极化效应,从而减轻肺部炎症反应。结论:(1)“开肺化痰解毒”法是临床治疗儿童病毒性肺炎(痰热闭肺证)的有效方法,能够有效缩短发热、咳嗽、喘息及肺部啰音的消退时间,安全性良好。清肺口服液组方是“开肺化痰解毒”法的核心用方之一。(2)网络药理学联合分子对接技术表明,清肺口服液中黄酮类有效成分槲皮素、山奈酚、木犀草素、柚皮素能够靶向作用于Akt疾病靶点,这可能是该方发挥治疗作用的关键途径之一。(3)RSV肺炎患儿(痰热闭肺证)血浆及RSV肺炎小鼠血浆、肺组织样本的脂质组学检测均提示,RSV感染会造成机体内脂质代谢紊乱,以长链脂肪酸合成代谢为主导。(4)清肺口服液通过抑制Akt信号通路,能够降低脂肪酸合成代谢,促进其分解代谢,从而减少长链脂肪酸累积。(5)清肺口服液依靠Akt信号通路介导的脂肪酸代谢重构进一步诱导了小鼠肺组织中M1型巨噬细胞向M2型极化,从而缓解了 RSV感染引发的肺部炎症反应。