黑素瘤是恶性程度较高的肿瘤之一,对普通的化疗和放疗均不敏感。现已发现,黑素瘤的生长和转移也依赖于微环境的激活。2011年,Wickline实验室发现,黑素瘤通过分泌的外泌体(exosome)改造前哨淋巴结,从而促进癌细胞向该淋巴结的转移。外泌体在此细胞间交流中扮演信息媒介的作用。然而,目前对于黑素瘤来源的外泌体如何与正常细胞相互作用,以及正常细胞受到哪些影响的报道还很少,相关的认识也很不充分。为研究恶性黑素瘤与周围微环境之间的相互作用,揭示其可能的分子机制,指导治疗黑素瘤的新药研发,进行此项研究。主要研究内容和结果如下:一、从小鼠黑素瘤B16细胞的培养液上清中提取并鉴定外泌体(B16-外外泌体)利用超速离心法从细胞上清中分离外泌体,透射电镜对其外形进行鉴定,nanosight进行粒径分析,western blot对其表面标记CD81、Alix进行定量分析,通过上述结果,证明成功从B16上清中提取出外泌体。二、观察B16-外泌体对间充质基质细胞(MSC)增殖迁移的影响及可能的分子机制首先,使用共聚焦荧光显微镜体外观察B16-外泌体可以成功被间充质基质细胞摄取。其次,CCK-8实验证实,摄取B16-外泌体的间充质基质细胞增殖率明显增高,transwell小室实验发现,后者迁移率亦明显增高。最后,免疫荧光检测及western blot发现,摄取B16-外泌体的MSC中的α-平滑肌肌动蛋白(α-SMA)表达量明显上升,这种趋势可部分被TGF-β受体的阻断剂SB431542所阻断。