论文部分内容阅读
目的:探讨氯胺酮是否通过减轻瑞芬太尼诱导术后痛觉过敏小鼠主要躯体感觉神经元中钙/钙调蛋白依赖性蛋白激酶磷酸化水平来减轻痛觉过敏,并研究Ca MKⅡ-NMDAR通路在瑞芬太尼诱导小鼠术后痛觉过敏机制中的作用。方法:雄性ICR成年小鼠,体重30-35g。第一部分取177只小鼠随机分为C组(生理盐水组)、I组(切口组)、R组(瑞芬太尼组)、RK组(瑞芬太尼联合氯胺酮组)、K组(氯胺酮组),采用经典的切口痛模型,并给予不同分组小鼠相应药物,先每组取9只小鼠分别于术前、术后0.5h、术后2h、术后5h、术后24h做行为学测试;再将I组、R组、RK组、K组小鼠每组取30只于术后即刻、术后0.5h、术后2h、术后5h、术后24h断头处死取大脑皮质(S1区),并应用western blot技术测得该部位p-Ca MKⅡ和t-Ca MKⅡ水平。另将I组、R组、RK组、K组小鼠每组3只于术后2h灌注固定,取脑组织做石蜡切片,分别进行免疫组化和免疫荧光染色,观察p-Ca MKⅡ在大脑皮质的表达。第二部分取110只小鼠随机分为I组(切口组)、R组(瑞芬太尼组)、RK组(瑞芬太尼联合氯胺酮组)、R+KN93组(鞘内给予KN93组)、RK+bayk8644组(瑞芬太尼联合氯胺酮并鞘内给予bayk8644组)、RK+KN93组(瑞芬太尼联合氯胺酮并鞘内给予KN93组)、bayk8644组(鞘内给予bayk8644组)、NMDA组(鞘内给予NMDA组)、RK+NMDA组(瑞芬太尼联合氯胺酮并鞘内给予NMDA组)、R+NMDA组(瑞芬太尼并鞘内给予NMDA组),采用经典的切口痛模型,并给予不同分组小鼠相应药物,先每组取8只小鼠分别于术前、术后0.5h、术后2h、术后5h、术后24h做行为学测试,然后每组取3只于术后2h断头处死取大脑皮质S1区,并应用western blot技术和免疫共沉淀技术检测NMDA和Ca MKⅡ相互作用。结果:与C组相比,R组、I组在处理后0.5h、2h、5h机械痛阈值下降,热潜伏期缩短;与R组相比,RK组在处理后0.5h、2h、5h机械痛阈值升高,热潜伏期延长。与C组相比,R组、I组在处理后0.5h、2h、5h皮质中p-Ca MKⅡ表达上调;与R组相比,RK组在处理后0.5h、2h、5h皮质中p-Ca MKⅡ表达下调。与RK组相比,RK+bayk8644组、RK+NMDA组在处理后0.5h、2h、5h机械痛阈值下降,热潜伏期缩短;与I组相比,bayk8644组、NMDA组在处理后0.5h、2h、5h机械痛阈值下降,热潜伏期缩短;与R组相比,R+KN93组在处理后0.5h、2h、5h机械痛阈值升高,热潜伏期延长,而R+NMDA组在处理后0.5h、2h、5h机械痛阈值下降,热潜伏期缩短。在免疫共沉淀试验中,NMDA与p-Ca MKⅡ发生相互作用。结论:氯胺酮通过下调瑞芬太尼诱导术后痛觉过敏小鼠皮质S1区Ca MKⅡ磷酸化表达水平来减轻瑞芬太尼诱导术后痛觉过敏,Ca MKⅡ-NMDAR通路参与瑞芬太尼诱导术后痛觉过敏。