论文部分内容阅读
[目的]肺癌主要发生支气管上皮细胞恶性,并且已经成全世界死亡率第三的恶性肿瘤,亟待我们寻找出早期诊断以及治疗的分子靶标。前期通过高通量测序技术发现lncRNADICER1-AS1在肺癌患者肿瘤组织中异常表达。本研究旨在分析LncRNADICER1-AS1在肺癌患者中的异常表达水平,并深入研究LncRNA DICER1-AS1促进肺癌细胞增殖、侵袭以及转移的分子机制,为肺癌的临床诊断以及治疗提供思路。[方法]1.收集昆明医科大学第三附属医院66例肺癌患者的癌组织和癌旁组织提取RNA后使用QPCR方式检测lncRNA DICER1-AS1 mRNA在两种组织中的表达量,并分析与临床资料之间的相关性;2.体外培养2种肺癌细胞系A549和H1299细胞以及人胚肺二倍体细胞KMB17,分别提取RNA后QPCR检测LncRNA DICER1-AS1在三种细胞中mRNA表达量;3.慢病毒转染肺癌细胞系A549以及H1299细胞通过表达shRNA下调lncRNA DICER1-AS1后,使用CCK8、transwell、划痕实验以及克隆形成实验观察DICER1-AS1下调是否会影响这些肿瘤细胞的相关生物学行为;4.使用QPCR检测66例肺癌以及癌旁组织中DICER1 mRNA表达量;5.采用RT-PCR以及Western Bolt检测慢病毒转染肺癌细胞系A549以及H1299细胞通过表达shRNA下调lncRNA DCER1-AS1后检测DICER1表达,分析lncRNA DICER1-AS1对DICER1的调控作用。[结果]1.lncRNA DICER1-S1在肺癌组织中mRNA表达量0.94(0.48,1.70)高于癌旁组织 0.65(0.45,0.86)(p<0.05)。2.A549 mRNA 表达量(23±2.7)、H1299mRNA表达量(42.3±0.48)均高于人二倍体正常细胞(KMB17)mRNA表达量(5.84±1.07)(p<0.001)。3.女性肺癌患者癌组织中DICER1-AS1 mRNA表达水平高于男性(p<0.05),但DICER1-AS1 mRNA表达量与TNM分期、年龄、肿瘤大小之间没有明显差异(p>0.05)。4.慢病毒转染肺癌细胞系后,下调DICER1-AS1实验组的CCK8在450nm吸光度低于对照组(p<0.05);transwell结果显示下调DICER1-AS1实验组侵袭能力弱于对照组(p<0.05);细胞克隆形成实验显示下调DICER1-AS1实验组的细胞集落数低于对照组(p<0.05);划痕实验显示,下调DICER1-AS1 A549细胞对照组仅在48h 比实验组划痕宽度小(p<0.05);下调DICER1-AS1 H1299细胞对照组在24h、48h比实验组划痕宽度小(p<0.05)。5.DICER1在肺癌组织中mRNA的表达量7.5(5.29,10.23)低于癌旁组织 10.11(5.78,15.12),(p<0.05);DICER1-AS1表达量下调的实验组A549细胞中DICER1mRNA水平(1.07± 1.6)高于A549对照组(p>0.05),实验组H1299细胞中实验组DICER1 mRNA水平(1.03±1.25)高于H1299对照组(p>0.05);实验组A549细胞中DICER1蛋白水平(98.3±7.6)高于A549对照组(18.3±7.6)(p<0.001),实验组H1299 细胞中实验组DICER1蛋白水平(56.6±5.7)高于H1299对照组(26.7±7.6)(p<0.001)。[结论]1.LncRNA DICER1-AS1在临床肺癌组织中高表达,可能在肺癌中起到促癌基因的作用,且可能与性别存在关系;2.lncRNA DICER1-AS1可以促进肺癌细胞的增殖、侵袭以及转移;3.lncRNA DICER1-AS1可能靶向抑制DICER1影响肺癌细胞的侵袭、增殖以及转移;4.lncRNA DICER1-AS1促进肺癌发生以及发展,有望成为临床诊断以及治疗的潜在靶点。