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P24蛋白是1型人类免疫缺陷病毒(HIV-1)的衣壳蛋白,在病毒的包装和成熟过程中起着重要的作用。P24蛋白在HIV-1感染者感染早期和晚期的血清中含量相对较高,因此p24蛋白被认为是HIV-1早期检测、献血筛查以及监测疾病进程的重要指标。本文根据数据库中p24蛋白的氨基酸序列,设计并合成编码基因且成功构建pET28a-p24原核表达质粒,成功在大肠杆菌BL21(DE3)中表达并用亲和层析纯化得到了纯度高于95%的重组p24蛋白,间接酶联免疫吸附测定(ELISA)结果表明重组p24蛋白可被抗p24抗原的单克隆抗体识别。使用重组p24蛋白免疫Balb/c小鼠,将免疫后血清效价达到融合要求的小鼠的脾细胞与SP2/0骨髓瘤细胞融合制备杂交瘤细胞。以p24蛋白作为抗原进行间接ELISA法筛选,经多次有限稀释法亚克隆得到33株稳定分泌抗p24抗原的抗体的杂交瘤细胞株,制备腹水并用辛酸硫酸铵联合沉淀法或Protein G注亲和层析法纯化单克隆抗体。将得到的单克隆抗体进行ELISA平台的双抗体夹心配对,接着将得到的34种能在ELISA平台配对的抗体组合应用于胶体金免疫层析检测(GICA)平台的p24抗原检测,最终筛选出灵敏度和特异性相对最高的单克隆抗体组合3-1D5和4-8A10,该抗体组合在GICA平台对p24抗原的最低检测浓度为25pg/mL。利用3-1D5和4-8A10抗体组合在GICA平台检测HIV-1p24抗原国家参考品,对其中全部的10个阳性参考品均检出阳性并可以检测参考品中浓度低至5U/mL的WHO推荐p24蛋白标准品,表现出较高的灵敏度。再检测HIV抗原抗体均为阴性的血清样品(n=153),其中出3份假阳结果,显示出了良好的特异性。实验结果表明用制备得到的单克隆抗体组合开发GICA法p24抗原快速检测有很好的应用前景,为HIV第四代快速检测试剂的研发打下了坚实的基础。