基于纳米粒子表面的聚合酶链反应

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研究基于纳米粒子表面的聚合酶链反应,不仅为PCR 产物的检测分离和纯化带来了方便,而且也为DNA 生物芯片和纳米粒子/DNA 纳米结构的制备提供了一种新的方法。目前,国外有一些文献报道了基于固相表面的聚合酶链反应,但是还有许多地方值得深入地探讨。本文系统研究了基于纳米粒子表面的聚合酶链反应。(1)首先采用反相微乳液的方法,利用正硅酸乙酯在碱性条件下水解,在γ-Fe2O3 的表面包裹一层SiO2。实验结果表明在磁核γ-Fe2O3 的表面成功地包裹了SiO2 层,形成了核壳型磁性纳米粒子;而且在合适的条件下,合成的核壳型磁性纳米粒子具有均匀的粒径和良好的单分散性。(2)通过共价键合的方法将oligoDNA 连接到MNP 表面,并首次利用表面增强拉曼光谱(SERS)方法对oligoDNA 在MNP 表面的键合进行了检测。实验结果表明巯基在银基底上有很好的SRES 效应,经由过硫键能够将oligoDNA 成功地键合到磁性纳米粒子的表面,并且通过其与互补单链DNA 的杂交验证了其仍然有很好的生物活性。这为基于磁性纳米粒子表面的聚合酶反应奠定了基础。(3)进一步系统地研究了基于磁性纳米粒子表面的聚合酶链反应(PCR)的规律。实验结果表明,在合适的条件下,连接在磁性纳米粒子表面的引物能够顺利地进行PCR。当一条引物连接在磁性纳米粒子表面,另一条引物没有连接在磁性纳米粒子表面时,PCR 受退火温度的影响较小。两条引物都连接在磁性纳米粒子表面时,PCR 受退火温度的影响较大;并且在一定温度范围里,退火温度越高,PCR 产物特异性越好。同时实验结果还表明通过两条引物连接在磁性纳米粒子表面的PCR,可以制得MNP/DNA 聚合体。(4)树枝状化合物大分子是一类新型合成高分子,它分子的大小、形状和功能基团可以在合成过程中进行严格设计和控制,因此引起了人们的极大兴趣。其中,聚酰胺-胺(PAMAM)是第一个合成的树枝状化合物大分子。目前,已经对PAMAM 在基因和药物载体以及磁共振成像等方面的应用进行了研究。本文还研究了基于
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