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猪瘟病毒(Classical swine fever virus,CSFV)与牛病毒性腹泻病毒(Bovine viral diarrhea virus,BVDV)同为黄病毒科(Flaviviridae)瘟病毒属(Pestivirus)的重要成员。CSFV的持续性感染是猪瘟难以根除的原因之一,对CSFV致病机理的阐明是制定有效防控措施的前提和基础。病毒在宿主细胞内的复制增殖,除了自身编码一些必需蛋白外,还需要宿主细胞多种成分的协助。分子伴侣(Molecular chaperone)是协助细胞在正常和胁迫条件下保持细胞内稳态的重要蛋白组分,并参与许多细胞生理反应过程。J-结构蛋白(J-domain protein interacting with viral protein,Jiv)是属于热休克蛋白40家族(Heat-shock proteins 40,HSPs 40)的分子伴侣,在BVDV的感染和致病中发挥着重要作用。CSFV与BVDV的相关研究资料可相互借鉴。BVDV在自然界中有两种不同的表现型,其中有宿主Jiv基因嵌合的毒株具有致细胞病变(CPE)的特性。这种现象也出现在CSFV的研究当中。BVDV的研究发现Jiv蛋白主要通过促进NS2-3蛋白的切割进而促进病毒的复制。本研究验证了Jiv蛋白核心区对CSFV复制的影响及其与病毒蛋白的相互作用,为筛选Jiv重组病毒的嵌合片段奠定基础。此外,克隆获得了CSFV C株全基因组c DNA,构建了C株的感染性克隆并进行了病毒的初步拯救。研究获得以下结果:1.通过构建Jiv蛋白核心区段的过表达和干扰质粒对细胞内Jiv进行过表达和干扰,验证了Jiv蛋白在CSFV复制中的促进作用。通过Co-IP的方法验证了Jiv蛋白与CSFV蛋白的相互作用。2.根据CSFV AF531433毒株的全基因组序列设计引物,利用RT-PCR及重叠延伸PCR的方法扩增获得覆盖全基因组的8个片段。在基因组的5′端分别引入T7启动子序列及CMV启动子、核酶序列,在其3′端分别引入线性化酶切位点、T7终止子序列及SV40 Poly A终止序列。获得两种包含该病毒全长c DNA克隆的感染性克隆p BR322-T7-CSFV及p BR322-CMV-CSFV。3.利用T7启动子,通过体外转录合成病毒RNA,检测其浓度后通过电击转染到ST细胞当中。利用CMV启动子将感染性克隆质粒转染PK15细胞进行病毒粒子拯救。对细胞连续传代后通过RT-PCR对病毒粒子核酸进行检测。