【摘 要】
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目的:探讨骨髓间充质干细胞(MSCs)移植对2,5-己二酮(HD)中毒大鼠脊髓组织凋亡的影响及其分子机制。材料和方法:3到4周龄SD大鼠用于MSCs的分离培养。100只雄性成年SD大鼠按随
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目的:探讨骨髓间充质干细胞(MSCs)移植对2,5-己二酮(HD)中毒大鼠脊髓组织凋亡的影响及其分子机制。材料和方法:3到4周龄SD大鼠用于MSCs的分离培养。100只雄性成年SD大鼠按随机数字表法分为5组:对照组(Control组)、干细胞对照组(MSC组)、2,5-HD组(HD组)、HD-生理盐水组(HD-NS组)和HD-干细胞组(HD-MSC组),每组20只。Control组、MSC组大鼠给予生理盐水,HD组、HD-NS组、HD-MSC组大鼠经给予浓度为400 mg/kg的HD溶液(腹腔注射,0.3 ml/100g);5周后处死HD组大鼠留取脊髓组织,其余4组动物继续进行在体试验。Control组、HD-NS组给予生理盐水1 ml,MSC组、HD-MSC组给予MSCs悬液(尾静脉注射,细胞数为5 X 107个/kg)。5周后处死所有大鼠留取脊髓组织。用TUNEL-DAPI双染色法检测各组大鼠脊髓组织凋亡情况;Quantitative real-time PCR(qRT-PCR)法检测大鼠脊髓NGF mRNA表达;Western Blot法检测各组大鼠脊髓 NGF、TrkA、p-TrkA、Akt、p-Akt、Bad、p-Bad 和细胞色素 C(Cyt C)蛋白表达;免疫共沉淀技术检测大鼠脊髓线粒体中Bad与Bcl-xL结合情况;分光光度法检测脊髓组织capsase-3酶活性;所有实验数据均采用SPSS17.0软件进行统计分析。结果:1.MSCs移植对凋亡影响HD组大鼠脊髓TUNEL 阳性细胞数显著高于 Control 组(P<0.05),HD-MS 组 TUNEL 阳性细胞显著低于 HD 组(P<0.05)。HD组凋亡指数分别为14.54%,显著高于Control组(0.14%)(p<0.05);HD-MSC组凋亡指数为2.25%,显著低于HD组(P<0.05)。2.MSCs移植对基因及蛋白表达影响HD组大鼠脊髓NGF mRNA表达量组显著低于Control组(P<0.05),HD-MSC组大鼠脊髓NGF mRNA表达量显著高于HD组(P<0.05)。HD组大鼠脊髓NGF、p-TrkA、p-Akt和p-Bad蛋白表达量显著低于Control组(P<0.05);HD-MSC 组 NGF、p-TrkA、p-Akt 和 p-Bad 蛋白表达显著高于 HD 组(P<0.05);各组之间TrkA、Akt和Bad蛋白的表达与Control组相比没有明显差异(P<0.05)。3.MSCs移植对Bad/Bcl-xL二聚体表达影响HD组大鼠脊髓中Bad/Bcl-xL在线粒体中结合力增强,二聚体含量显著高于Control组(P<0.05);HD-MSC组大鼠脊髓中Bad/Bcl-xL在线粒体中结合力减弱,二聚体含量显著低于HD组(P<0.05)。4.MSCs移植对Cyt C表达影响MSCs移植组大鼠脊髓线粒体中Cyt C含量高于HD组(P<0.05),相反胞浆中Cyt C含量低于HD组(P<0.05)。5.MSCs移植对Caspase-3活性影响HD组Caspase-3活性较Control组显著升高(P<0.05),HD-MSC组Caspase-3活性较与HD组显著降低(P<0.05)。结论MSCs移植能抑制HD暴露大鼠脊髓组织细胞凋亡。MSCs移植可能通过NGF激活PI3K/Akt/B ad信号转导通路抑制HD暴露大鼠脊髓组织凋亡。
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