论文部分内容阅读
背景与目的近年来毒品所造成的死亡案件越来越多。吸毒死者体内所含的毒品可影响在其上取食的嗜尸性蝇类幼虫的生长发育。利用嗜尸性蝇类发育历期来推断因吸毒死亡者相关的死后经历时间（postmortem interval,PMI）,必须将毒品对其生长发育的影响考虑在内。在新型毒品中,氯胺酮所导致的死亡较为常见。研究表明,利用大头金蝇Chrysomya megacephala发育历期推断PMI是一种较可靠的方法。目前,尚无关于氯胺酮对大头金蝇生长发育影响的研究。了解氯胺酮对大头金蝇生长发育的影响,为法医昆虫毒理学提供基础性资料,可期望用于司法实践,指导与氯胺酮相关的死亡个体的PMI推断。方法将自然环境中诱得的大头金蝇卵在恒温室内连续培养3代。取部分第3代成蝇进行32℃实验,其余作为育种组继续饲养。将绞碎的新鲜猪肉、蒸馏水及琼脂糖混合制成均质悬浊液4份,每份300g。向每份悬浊液中分别混入0、25mg/kg、50mg/kg、100mg/kg剂量的盐酸氯胺酮注射液并充分混匀。分别标记为K0、K1、K2、K3并静置,低温保存备用。在室温下用新鲜猪肝诱使育种组成蝇产卵,记录产卵时间。将3～5只成虫所产卵块均分为4份,每份约400～500粒,分别接种至4个培养基上。将培养基置入32℃恒温室内饲养,湿度保持在75±10%,光周期设为12h:12h。幼虫孵出后16h开始取样,每组每次随机留取10只幼虫,每隔12h留取一次样本直至多数（95%以上）幼虫离食。幼虫样本用XA液处死,Hood氏液保存。测得的幼虫体长数据采用mean±SD形式来表示,体重数据测每组样本总体重并计算平均体重,计算每组幼虫达到最大平均体长、最大平均体重时的体长、体重平均增长速率（最大平均体长/时间、最大平均体重/时间）,并绘制相关生长曲线。观察并记录蝇卵孵化的时间、多数幼虫（>95%）离食时间、多数幼虫（>95%）化蛹时间及多数蛹（>95%）羽化的时间,并以产卵的时间作为大头金蝇发育历期零点,分别计算每组发育积温。统计蛹数及羽化出的成蝇数,计算羽化率。各组间比较用方差分析,数据由Excel2007计算并处理分析。实验完成后,分别在28℃、24℃下重复以上实验。结果一、在实验剂量范围内,氯胺酮能减缓大头金蝇幼虫的生长发育速度。1.氯胺酮能减缓大头金蝇幼虫体长、体重的增长速率。在实验剂量范围内,最高可使大头金蝇幼虫平均体长增长速率降低20.0%,平均体重增长速率降低23.1%。氯胺酮对大头金蝇幼虫的最大体长未见明显影响;实验组与对照组最大体重仅在32℃时差异较明显,其他温度条件下组间无统计学差异。2.氯胺酮对大头金蝇幼虫体长和体重的增长率的抑制作用与幼虫的氯胺酮摄入量间存在一定的相关性,其表现为幼虫在含有氯胺酮的食物上取食时间越长,氯胺酮的摄入量越多,其生长发育速度也越慢。二、在羽化率方面,32℃及28℃时,实验组羽化率与对照组间未见明显差异;24℃时,实验组成虫羽化率较32℃及28℃时分别平均降低41.3%及36.4%,而各实验组间羽化率的降低程度无统计学差异。三、在不同温度下,氯胺酮对大头金蝇发育历期和发育积温均存在一定影响。1.氯胺酮能抑制大头金蝇的生长发育,延长大头金蝇1～3龄幼虫期、预蛹期及蛹期时间和发育积温,且其增长幅度在一定剂量范围内随剂量升高而加大。环境温度越低,幼虫在含有氯胺酮的食物上取食时间越长,其总发育历期及总发育积温的增幅越大。2. 32℃及24℃时,氯胺酮可显著延长1～3龄幼虫期时间;在28℃恒温条件下,氯胺酮可显著延长蛹期时间。3.非中毒死亡者应用发育积温来推断PMI偏差较小,中毒死亡者通过幼虫体长和体重来推断PMI更为准确。结论本课题首次获得有关氯胺酮对大头金蝇生长发育历期影响的数据。研究结果表明,在实验剂量范围内,不同温度条件下,氯胺酮对大头金蝇生长发育速度、羽化率、发育历期均存在一定的抑制作用,且这种抑制作用与幼虫的氯胺酮摄入量间存在一定程度的相关性。氯胺酮摄入量越大,抑制作用越明显。这种抑制作用可导致实际PMI推迟最多达25h;若利用大头金蝇蛹来推断PMI,实际PMI最多可推迟44h。