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猪圆环病毒2型(Porcine circovirus type 2, PCV2)被公认为在世界范围养猪业中造成严重经济影响的最重要的病毒之一。由于病毒、宿主的免疫力、混合感染情况和其他环境特征的差异,PCV2能引起不同的疾病,统称为圆环病毒病(porcine circovirus diseases, PCVDs)。我国是一个养猪大国,PCVDs在我国一直呈上升趋势,给我国的养猪业造成了巨大的经济损失。血清抗体的检测常被用来分析PCV2的感染情况以及评价疫苗的免疫效果。ELISA因其敏感、特异、检测快速、简便等优点,而被广泛应用。然而研究表明,国内检测PCV2抗体的ELISA试剂盒普遍存在敏感性偏低的问题,而进口试剂盒因其价格昂贵,难于普及应用。因此,建立一种快速、简便、敏感、特异的诊断方法对于PCV2的预防和控制具有重要意义。本研究利用PCR方法扩增PCV2 ORF2全长基因,构建原核表达载体pET-30a-Cap,转化E. coli BL21(DE3)。在SDS-PAGE分析基础上,结合ImageJ和Graphpad prism 5.0软件的分析,对影响重组Cap蛋白表达的诱导温度,诱导起始OD600， IPTG浓度及诱导时间等因素进行了优化,确定最佳表达条件为：当菌体浓度达到1.0～1.5时,加入终浓度为0.2 mM的IPTG,37℃恒温摇床175 rpm振荡培养5h。为得到高纯度的重组Cap蛋白,对重组Cap蛋白纯化条件进行了探索,确定蛋白洗涤液中咪唑浓度为100 mM,蛋白洗脱液中咪唑浓度为300 mM。纯化后的蛋白进行Western blot鉴定,重组Cap蛋白只与PCV2标准阳性血清反应,与E.coli BL21(DE3)阳性血清和pET-30a/ BL21(DE3)阳性血清均不发生反应,表明纯化的重组Cap蛋白具有良好的特异性和反应原性。以纯化的重组Cap蛋白为包被抗原,优化试验条件,建立了PCV2 Cap-ELISA检测方法：抗原包被条件为3 μg/mL,4℃包被过夜；封闭液为5%马血清+2.5%BD脱脂乳,37℃封闭2 h；血清作用条件为200×,37℃孵育45 min；兔抗猪HRP-IgG稀释度为5000×,37℃孵育45 min；显色条件为37℃,15 min；利用TG-ROC方法确定临界值为0.26即当S/P≥0.26时,结果判定为阳性；S/P<0.26时,结果判定为阴性。该方法与PRV阳性血清、TGEV阳性血清、RV阳性血清、PPV阳性血清无交叉反应。组装的试剂盒的批内和批间重复性试验结果变异系数分别为0.32%-7.8%和1.09%-7.71%,具有良好重复性。在与8种市售试剂盒的符合率对比试验中,同3种进口试剂盒的符合率分别为89.22%、83.83%和89.22%,符合率较高且一致；同5种国产试剂盒的符合率分别为67.67%、80.23%、54.49%、65.87%、71.25%和84.43%,符合率参差不齐。表明,PCV2 Cap-ELISA抗体检测试剂盒检测结果可靠,能用于临床样品的检测。