番茄SlMYB86应答硝酸盐胁迫的分子机制

来源 :昆明理工大学 | 被引量 : 0次 | 上传用户:seryanny
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次生盐渍化是我国设施土壤中存在的主要问题之一。研究表明,设施土壤的盐分组成主要为NO3-和Ca2+。过量的NO3-抑制植物生长发育,严重制约着设施蔬菜的发展。MYB转录因子是植物中最大的转录因子家族之一,在植物非生物胁迫中发挥重要作用。一氧化氮(Nitric oxide,NO)是植物生长发育和逆境胁迫中一个重要的信号分子,S-亚硝基化是NO发挥生物活性的主要方式。硫氧还蛋白(thioredoxin,Trx)调控植物体内的氧化还原状态,并发挥去亚硝基化的功能。本论文主要对番茄R2R3-MYB型MYB转录因子SlMYB86应答硝酸盐胁迫的分子机制进行研究,取得结果如下:1、对SlMYB86生物信息学分析表明,SlMYB86与SlMYB26亲缘关系较近,SlMYB86转录因子N末端含有2个Myb_DNA-binding结构域,属于R2R3型MYB转录因子。亚细胞定位显示SlMYB86定位于细胞核中。硝酸盐胁迫并外源施加NO供体硝普钠(SNP)后发现番茄幼苗中SlMYB86表达显著增加,生物素转化实验表明,SlMYB86能够发生S-亚硝基化。通过原核表达系统诱导并纯化了番茄SlMYB86重组蛋白,免疫小鼠获得抗体。生物素转化实验证明SlMYB86在体外能够发生S-亚硝基化。2、通过plant CARE网站对SlTrx启动子进行分析,发现SlTrx启动子上含有MYB结合位点。荧光素酶(Luciferase)实验表明SlMYB86激活SlTrx启动子的表达,凝胶阻滞实验(EMSA)进一步验证了SlMYB86与SlTrx启动子5’-GTCAAC-3’区域相结合。Ch IP-q PCR结果显示SlMYB86与SlTrx启动子中C3区域上的MYB元件相结合。通过酵母文库筛选获得了93个可能与SlMYB86发生互作的蛋白,通过酵母双杂交初步验证了E2泛素结合酶和V型ATP酶与SlMYB86蛋白存在相互作用。3、获得了SlMYB86过表达的转基因番茄,并对转基因番茄进行了硝酸盐胁迫分析。结果表明,硝酸盐胁迫下,SlMYB86过表达番茄生长状况优于野生型(wild type,WT),SlMYB86过表达植株中ROS、H2O2和O2-含量显著低于WT,表明硝酸盐胁迫下SlMYB86过表达植株受到的氧化损伤较小。SlMYB86过表达植株的抗氧化物酶SOD、CAT、POD、APX活性和表达量在硝酸盐胁迫下均高于WT植株,SNO含量、NR活性和S-亚硝基化水平也高于WT植株。结果说明,SlMYB86过表达增强了番茄对硝酸盐胁迫的抗性。4、获得了SlTrx RNAi转基因番茄,并对SlTrx RNAi番茄进行了硝酸盐胁迫抗性分析。硝酸盐胁迫下,RNAi植株与WT相比株高和鲜重降低,H2O2和O2-含量明显高于WT植株。SlTrx RNAi番茄的抗氧化物酶SOD、CAT、POD、APX活性和表达量在硝酸盐胁迫下均低于WT植株,SNO和S-亚硝基化水平也低于WT植株。结果说明,SlTrx RNAi降低了番茄在硝酸盐胁迫下的抗性。
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