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肺炎克雷伯菌β―内酰胺酶编码基因的克隆、测序及基因定位本文以一株临床分离的肺炎克雷伯菌99-799株为研究对象，对其所产β-内酰胺酶的编码基因进行了研究。肺炎克雷伯菌99-799株对头孢菌素类包括第三代头孢菌素、氨曲南、环丙沙星、酶抑制剂和庆大霉素均呈高度耐药，仅对亚胺培南、头孢西丁敏感。这株细菌包括大、中、小3个不同的质粒，共编码了3种pI值分别为5.4、7.8和9.0的β-内酰胺酶。用β-内酰胺酶通用引物、blaTEM、blaSHV和blaAmpC共4对引物进行聚合酶链反应（PCR），结果分别得到480、748、867和395bp的阳性片段。序列测定和同源性分析表明，3种编码基因分别属于TEM、SHV和AmpC型β-内酰胺酶，其中TEM和SHV型的氨基酸序列分别与TEM-1和SHV-28完全相同，AmpC型与国外报道的一株肺炎克雷伯菌中质粒介导的MIR-1 AmpC酶具有90%的同源性。为了获得每一个质粒并对其编码基因进行初步定位，我们做了转化、接合和PCR研究。通过转化，使大、小质粒从肺炎克雷伯菌99-799株转移到了大肠埃希菌DH5α中，这2个质粒上均存在TEM-1的编码基因，且大质粒上还存在SHV-28的编码基因；通过接合，使大、中质粒从肺炎克雷伯菌99-799 株转移到了大肠埃希菌DH5α中，中质粒上存在AmpC的编码基因。此外，肺炎克雷伯菌99-799株的染色体上也存在AmpC的编码基因。综上所述，肺炎克雷伯菌99-799株产3种β-内酰胺酶，分别是TEM-1、SHV-28和AmpC型β-内酰胺酶