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本研究以中国莲‘红牡丹’的顶芽和腋芽为外植体,探索通过从生芽途径再生植株的方法进行快速繁殖。主要研究了不同时间组合的消毒效果；外植体萌发及组培苗增殖的各种影响因素,初步建立了‘红牡丹’的离体快繁体系,同时探索了以幼胚为外植体的愈伤组织的诱导。主要研究结果如下:
1.外植体最佳消毒时间和消毒方法:新鲜外植体经流水冲洗4-6小时,置于超净工作台上依次经70％酒精60s、0.2％NaClO30min、0.1％HgCl215min,其污染率是7.4％。
2.初代培养:①诱导‘红牡丹’芽萌发的最适培养基为MS+6-BA2.0mg/L+IBA0.5mg/L+GA30.5mg/L+5％蔗糖,在此培养基中芽的萌发率为83.3％,‘秋水长天’的最适初代培养基为MS+6-BA3.0mg/L+IBA0.1mg/L+GA30.5 mg/L+5％蔗糖,接种在此培养基中的芽全部萌发。②顶芽的萌发率明显高于腋芽。③取材时间对顶芽的萌发有一定的影响,以冬季休眠种藕的顶芽为外植体时,GA3的添加可以消除这一影响。
3.继代培养:BA、IBA浓度以及蔗糖浓度对‘红牡丹’组培苗的增殖影响效应显著,试验结果表明‘红牡丹’最佳增殖培养基为MS+6-BA1.0mg/L+IBA0.5mg/L+5％蔗糖,增殖系数达4.83,试验没有发现‘秋水长天’的最佳增殖培养基。
4.莲芽诱导出的组培苗在培养基中很容易生根,‘秋水长天’在接种后25天的平均生根率达36.45％,以MS+6-BA2.0mg/L+IBA0.5mg/L+GA30.5mg/L+5％蔗糖、MS+6-BA2.0mg/L+IBA1.0mg/L+GA30.5mg/L+5％蔗糖培养基中的生根率最高,均为50％；而‘红牡丹’的平均生根率也达31.25％,其中MS+6-BA3.0mg/L+IBA1.5mg/L+GA30.5mg/L+5％蔗糖培养基中组培苗的生根率高达75％。
5.愈伤组织诱导中发现6-BA6mg/L+2,4-D6mg/L+KT2mg/L+NAA0.5mg/L+3％蔗糖为中国莲幼胚愈伤诱导的最佳培养基,愈伤诱导率为80％。