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目的:IFN-α为慢性乙型肝炎主要的抗病毒治疗药物之一,宿主或病毒的多种因素与其疗效相关。目前,尚无促炎细胞因子IL-17是否可调节IFN-α抗HBV作用进而影响IFN-α的临床疗效的相关报道。因此,本课题拟探讨IL-17对IFN-α抗HBV作用的调节及机制,以期为阐释CHB患者IFN-α疗效不佳原因提供新的实验依据。方法:1.以转染pcDNA3.1-HBV1.3质粒的HepG2(HepG2-HBV1.3)为细胞模型,用0 ng/ml、0.2 ng/ml、1 ng/ml、25 ng/ml、50 ng/ml、100ng/ml的IL-17预处理HepG2-HBV1.3细胞24h,再用1000 IU/mL IFN-α作用48h。用ELISA法检测细胞培养上清HBsAg与HBeAg水平;western blot法检测细胞内HBsAg及HBcAg的蛋白表达;qRT-PCR法检测上清HBV-DNA及细胞内HBsAg与HBcAg mRNA的表达水平,比较分析在不同浓度的IL-17作用下对IFN-α抗HBV效应的影响;2.用50 ng/mlIL-17预处理细胞6h,12h,24h,48h,再用1000 IU/mL IFN-α作用48h。用ELISA法检测细胞培养上清HBsAg与HBeAg水平;western blot法检测细胞内HBsAg及HBcAg的蛋白表达;qRT-PCR法检测上清HBV-DNA及细胞内HBsAg与HBcAg mRNA的表达水平。比较分析IL-17作用不同时间下对IFN-α抗HBV效应的影响;3.用50ng/ml的IL-17预处理HepG2-HBV1.3细胞24h,再用1000 IU/mL IFN-α作用48h。用western blot法检测细胞内p-STAT1、p-STAT2及IRF9蛋白水平;qRT-PCR法检测细胞内干扰素刺激基因ISG15、MX1、ISG20、IFI16、IRF9、SCOS1及USP18 mRNA的表达水平。分析在IL-17作用下IFN-α信号通路分子及下游基因的表达变化;4.实验数据用平均数±标准差表示,用SPSS23.0软件进行统计分析,单因素方差分析(ANOVA)进行多组间的比较,以P<0.05为差异具有统计学意义。结果:1.与细胞对照HepG2-HBV1.3相比,1000 IU/mL IFN-α作用48h或72h时,细胞上清HBsAg与HBeAg水平,以及细胞内HBsAg与HBcAg mRNA的表达均明显下降,差异均具有统计学意义(P值均<0.05);而不同浓度IL-17单独作用HepG2-HBV1.3细胞后,细胞上清HBsAg及HBeAg表达无显著性变化。2.与单独1000 IU/mL IFN-α作用48h的处理组相比,较高浓度(25、50、100ng/ml)IL-17预处理HepG2-HBV1.3细胞24h后细胞上清HBsAg、HBeAg与HBV-DNA水平,以及细胞内HBsAg与HBcAg的mRNA或蛋白水平均高于单独IFN-α处理组,差异均具有统计学意义(P值均<0.05);同时,50ng/ml IL-17预处理HepG2-HBV1.3细胞12h或24h后,细胞上清HBsAg、HBeAg与HBV-DNA水平,以及细胞内HBsAg与HBcAg的mRNA或蛋白水平也均高于单独IFN-α处理组,差异均具有统计学意义(P值均<0.05)。3.与单独1000 IU/mL IFN-α作用48h的处理组相比,50ng/mlIL-17预处理HepG2-HBV1.3细胞24h时,细胞内stat1蛋白磷酸化水平(p-STAT1)、stat2蛋白磷酸化水平(p-STAT2)及IRF9蛋白的表达水平低于单独IFN-α处理组,差异均具有统计学意义(P值均<0.05);同时,IL-17预处理组细胞内干扰素刺激基因ISG15、ISG20、Mx1、IFI16及IRF9 mRNA的表达水平低于单独IFN-α处理组,而SCOS1及USP18mRNA的水平高于单独IFN-α处理组,差异均具有统计学意义(P值均<0.05)。结论:1.一定浓度的IL-17作用下,可显著减弱IFN-α抗HBV的效应;2.IL-17减弱IFN-α抗HBV效应的可能机制为:IL-17可使IFN-α诱导的信号转导分子p-STAT1、p-STAT2及IRF9表达降低,进一步使下游与抗HBV相关的干扰素刺激基因ISG15、ISG20、Mx1等的表达下降,从而使IFN-α抗HBV的效应减弱;同时,IL-17还可增强IFN-α信号通路的抑制性因子USP18与SCOS1的表达,来进一步抑制IFN-α的抗病毒效应。