【摘 要】
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建立了以纳米级磁性粒子为载体固定化脂肪酶的方法,优化了脂肪酶的固定化条件,考察了固定化酶的性质。制备的磁性载体平均粒径20nm,具有超顺磁性,分散和再分散效果好。固定化酶的
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建立了以纳米级磁性粒子为载体固定化脂肪酶的方法,优化了脂肪酶的固定化条件,考察了固定化酶的性质。制备的磁性载体平均粒径20nm,具有超顺磁性,分散和再分散效果好。固定化酶的最适吸附时间为60min,酶用量为100mg酶/100mg载体,固定化酶的酶活达到718U/g载体。结果表明,经纳米磁性粒子固定化后,脂肪酶得到活化,固定化酶比活为游离酶的1.8倍。同时,固定化脂肪酶的pH稳定性得到显著提高。脂肪酶在非水相系统中具有水相反应所不具备的很多优点,利用固定化的脂肪酶在有机溶剂中的催化特性,对手性物质外消旋薄荷醇进行不对称的酯化反应,达到两种对映体的拆分。利用具备手性固定相的气相色谱对酯化结果进行分析,确定了适宜的分析条件,从而为研究酶催化反应提供了有力的依据。考察了非水相介质中外消旋薄荷醇不对称酯化反应的特点,从反应时间、反应温度、酶用量、体系水活度、溶剂以及酰基供体选择等方面对反应进行了全面研究。自制固定化酶催化的外消旋薄荷醇酯化反应最佳时间为2.5h,最适加酶量为200U,最适底物浓度为0.2mmol/ml,最适温度为30℃,正己烷和丙酸酐分别为适合实验条件的溶剂和酰基供体,酶的催化活性随反应体系的水活度的降低而升高。在实验条件下,外消旋薄荷醇得到了有效的分离,e.e.%为84.5%,E值为11.9,薄荷醇转化率为37.8%。
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