shRNA抑制高尔基体α-甘露糖苷酶II基因的表达对胃癌细胞的侵袭力的影响及机制

来源 :重庆医科大学 重庆医科大学 | 被引量 : 0次 | 上传用户:yidao
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目的:  初步研究分析,在中、低两种分化人胃癌细胞系中,高尔基体α-甘露糖苷酶Ⅱ(GMⅡ)各自的差异表达,以探讨GMⅡ在胃癌发生发展中的作用。  方法:  1.应用阳离子脂质体技术手法,将合成的GMⅡ靶向基因pGPU6/GFP/Neo-GMⅡ编号1406,分别同时转染至低分化胃癌细胞MGC-803和中分化胃癌细胞SGC-7901中,并借助荧光倒置显微镜观察荧光显示并计算转染率,最后经过G418筛选出稳定转染的细胞株。  2.利用Western-blot和RT-PCR检测转染以后两株细胞中GMⅡ和E-cadherin、α-catenin蛋白及mRNA表达变化情况。  3.同时利用体外细胞划痕试验和Transwell细胞小室侵袭实验来测定并比较GMⅡ被靶向沉默后,不同分化细胞及其对照组的侵袭能力。  结果:  GMⅡ shRNA转染后胃癌MGC-803和SGC-7901细胞的GMⅡ的蛋白和mRNA表达明显抑制,E-cadherin和α-catenin的蛋白表达明显升高(P<0.05);细胞划痕实验结果显示,GMⅡ shRNA质粒转染组与其相应对照组比较,沉默GMⅡ后两种分化的胃癌细胞侵袭力都有所下降(P<0.05),Transwell细胞小室侵袭实验:GMⅡ shRNA组胃癌细胞较空白对照组,阴性对照组(shNC)细胞侵袭能力都明显降低,18h穿过Transwell的细胞数分别为:(65±5),(197±6),(186±5);(72±4),(178±4),(184±5)与各自对照组比较,差别具有统计学意义(P<0.05);  结论:  GMⅡ基因沉默后的不同分化胃癌细胞的侵袭能力下降,可能与上调E-cadherin、α-catenin的表达相关。
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