褪黑素@介孔二氧化硅肠溶纳米粒的制备、表征与生物利用度评价

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褪黑素(MLT)是一种由哺乳动物松果体分泌的一种天然物质,有着重要的生理作用,但是褪黑素是一种水溶性低、渗透率高的小分子化合物,根据生物药剂学分类系统,褪黑素被分为Ⅱ类药物,表现出生物半衰期短和生物利用度低等特点。因此,本文利用纳米二氧化硅(SiO2)负载褪黑素,肠溶材料HP55进行包衣,制备得到MLT-SiO2-HP55纳米粉,与褪黑素原粉相比具有很好的缓控释特征,不仅提高了褪黑素的溶解度和溶出度,而且生物利用度显著提高。本研究的工作和结果如下:(1)根据褪黑素在不同溶剂中的最大溶解度,设定了褪黑素浓度梯度实验,结果表明,随着褪黑素在不同溶剂中浓度逐渐升高,二氧化硅载药量也逐渐增大,通过线性拟合发现载药量与褪黑素浓度之间呈现良好的线性关系,与溶剂种类无关,Langmuir和Freundlich方程对药物浓度实验数据进行拟合,证明纳米二氧化硅的吸附能力很强,是物理吸附过程。(2)纳米二氧化硅吸附褪黑素过程中,最佳药物浓度为40mg/mL,二氧化硅最佳浓度是55mg/mL,最佳吸附温度为25℃,吸附的最佳时间是10min,最佳转速是1400r/min,在最佳条件下所制备的MLT-SiO2纳米球,二氧化硅的载药量为24.73%。(3)HP55在水溶液中不易溶解,在丙酮溶液中易溶解,所以本文采用去溶剂法制备MLT-SiO2-HP55纳米球,丙酮作为溶剂,水作为反溶剂,水溶性PVA作为粘合剂。对HP55在MLT-SiO2-HP55纳米球的含量进行梯度实验,得到HP55含量分别为3.28%、7.89%和 15.41%的 MLT-SiO2-HP55 纳米球。(4)对获得的MLT-SiO2-HP55纳米球进行透射电镜扫描(TEM)、比表面积(BET)测定、傅里叶红外光谱(FTIR)测定、X-射线衍射(XRD)测定、差示热量扫描(DSC)和热重量分析(TGA)测定,可以看出纳米二氧化硅表面有很多的孔道,而且比较光滑,在负载褪黑素后,大部分的孔道被填充,而且表面开始变得粗糙,比表面积变小,在HP55加入后,二氧化硅表面被包裹形成肠溶包衣,比表面积变得更小,大部分的褪黑素被负载在二氧化硅的孔道内,少部分的褪黑素被负载在纳米二氧化硅的表面,HP55包裹在MLT-SiO2的表面,在MLT-SiO2和MLT-SiO2-HP55纳米球中,褪黑素以无定型态存在,气相色谱检测MLT-SiO2-HP55纳米粉中丙酮含量远低于ICH对Ⅲ类有机溶剂的限制标准,适合药品标准,体外抗氧化能力测定证明纳米二氧化硅负载褪黑素后,体外抗氧化能力明显强于原褪黑素,而且随着包衣材料HP55含量的增加,纳米二氧化硅负载的褪黑素表现出的抗氧化能力逐渐增强,远大于原褪黑素。(5)对MLT-SiO2-HP55纳米粉在人工胃液(SGF,pH 1.2)和人工肠液(SIF,pH 7.4)中的释放进行评价分析,结果表明,二氧化硅负载褪黑素能够增加褪黑素在人工胃、肠液中的释放率,HP55肠溶衣包裹纳米二氧化硅可使其中的褪黑素在人工胃液中释放量降低,而在人工肠液中释放量增加,原褪黑素、MLT-SiO2、MLT-SiO2-HP55(HP55的含量分别为3.28%、7.89%和15.41%)在人工肠液中的褪黑素累积释放率分别是在人工胃液中的0.80、0.91、1.14、1.50和2.47倍,纳米二氧化硅负载褪黑素能够提高褪黑素的溶解度和溶出度,HP55含量为15.41%的MLT-SiO2-HP55适合口服给药。(6)对MLT-SiO2-HP55进行大鼠体内生物利用度评价,与原褪黑素相比,MLT-SiO2-HP55能够使Tmax(血药浓度达峰时间)从15min延长至30min,Cmax(血药峰浓度)从168.86 ng/mL提高到383.71 ng/mL,MLT-SiO2-HP55的曲线下面积是褪黑素原粉的3.5倍,消除半衰期t1/2从22min延长至57min,证明MLT-SiO2-HP55在大鼠体内具有一定的缓释作用,提高褪黑素在大鼠体内的相对生物利用度。
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