新孢子虫和弓形虫两者有密切的亲缘关系,都属于细胞内寄生原虫,无论是在形态学、分子生物学特性和临床症状及病变等都非常相似,并且感染孕畜都可导致流产、死胎、木乃伊胎等症状。AMA1顶膜抗原标记在微线体的局部,表达于新孢子虫与弓形虫的速殖子和缓殖子期,与虫体侵入宿主细胞和复制功能紧密相关。研究证实,AMA1蛋白可有效控制新孢子虫和弓形虫这两种寄生虫的入侵,是新孢子虫和弓形虫一种潜在的候选疫苗抗原。目前,对新孢子虫病与弓形虫病尚无有效药物和疫苗防控。本试验根据新孢子虫和弓形虫AMA1基因序列的开放阅读框,设计新孢子虫和弓形虫交叉抗原AMA1基因通用引物,构建pMD18-T-Nc/TgAMA1重组克隆质粒、重组腺病毒穿梭质粒ADV4-Nc/TgAMA1,ADV4-Nc/TgAMA1和骨架质粒pacAd5线性化后共转染293T细胞包装Ad5-Nc/TgAMA1重组腺病毒,扩增、纯化制备Ad5-Nc/TgAMA1重组腺病毒载体疫苗。接种BALB/c小鼠,同时设置pVAX1-Nc/TgAMA1质粒组及PBS对照组,ELISA法测定接种小鼠血清中IgG抗体水平和IFN-γ、IL-4细胞因子水平。三免2周后,将每组BABL/c小鼠分为两小组,分别腹腔攻击新孢子虫速殖子和弓形虫速殖子,观察小鼠的临床症状和统计存活率。结果显示,获得Ad5-Nc/TgAMA1重组腺病毒滴度为109 PFU/mL,接种BALB/c小鼠后,IgG抗体水平,Ad5-Nc/TgAMA1疫苗组极显著高于pVAX1-Nc/TgAMA1质粒组和PBS对照组(P<0.01);IFN-γ和IL-4细胞因子水平,Ad5-Nc/TgAMA1疫苗组均极显著高于pVAX1-Nc/TgAMA1质粒组和PBS对照组(P<0.01)。经攻虫试验表明,接种Ad5-Nc/TgAMA1疫苗组BABL/c小鼠对新孢子虫和弓形虫攻击分别有80%和60%的存活率,pVAAX1-Nc/TgAMA1质粒组分别有50%和20%的存活率,而PBS对照组分别有20%和0%的存活率。说明本试验制备的Ad5-Nc/TgAMA1疫苗对新孢子虫和弓形虫攻击具有良好免疫保护作用,达到了同时预防新孢子虫和弓形虫感染的目的。