10-HDA对G~+抑菌活性及机制的研究

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10-羟基-2-癸烯酸(10-HDA)是蜂王浆的标志性物质,大约占蜂王浆的1.4%~2.0%,其结构式为HO-CH2-(CH2)6-CH=CH-COOH(C10H18O3)。10-HDA具有抑菌、提高免疫力、抗辐射和降血脂等多种功效。虽然10-HDA对细菌具有良好的抑制效果,但对其抑菌机理却是知之甚少。因此,本论文以金黄色葡萄球菌和枯草芽孢杆菌为实验菌株,主要从细胞生物学、生物化学和分子生物学等方面入手,对10-HDA的抑菌机理进行较为系统的研究。取得的结果如下:1、10-HDA生物活性的确定为了确定与分析10-HDA的抑菌性能,采用牛津杯法,倍半稀释法进行抑菌性能测定实验。结果表明,10-HDA对多种病原细菌具有明显的抑制作用,表现出广谱抗菌活性,且抑菌效果随着10-HDA浓度的增加显著提高。其中,对金黄色葡萄球菌以及枯草芽孢杆菌的最小抑菌浓度(MIC)均为0.62mg/mL。2、10-HDA对金黄色葡萄球菌细胞膜及代谢活力的影响通过对金黄色葡萄球菌生长曲线、细胞膜通透性、细胞代谢活力等方面的研究,探讨10-HDA对金黄色葡萄球菌细胞膜的作用机理。结果表明10-HDA可以破坏金黄色葡萄球菌细胞的完整性,促使细胞膜通透性增加,使得胞内大量离子以及具有紫外吸收的大分子物质泄漏,细胞代谢发生紊乱。3、10-HDA对枯草芽孢杆菌基因组DNA及蛋白合成的影响以枯草芽孢杆菌为供试菌,采用凝胶阻滞实验及原子力显微镜观察10-HDA与菌体DNA结合情况,并采用DNA琼脂糖凝胶电泳观察10-HDA作用后菌体DNA含量的变化,以及10-HDA对菌体基因组PCR的影响。结果显示,当10-HDA浓度达到0.62mg/mL时,菌体中基因组DNA的合成量明显减少,而且10-HDA与细菌基因组DNA紧密结合。对基因组DNA的PCR影响实验进一步证明,当PCR体系中10-HDA的浓度达到1.0mg/mL时,DNA的合成被完全阻碍。综上所述,通过实验,我们初步推断10-HDA对G+菌的抑菌机理是:10-HDA通过改变膜蛋白构象,破坏细胞膜,导致大量物质外泄,使细胞代谢发生紊乱,进入菌体后与基因组DNA结合,抑制DNA的复制及转录,菌体生长受到抑制,并最终导致菌体死亡。
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