目的：持续的T细胞活化是目前公认的驱动HIV感染者疾病进展的一个主要因素，但导致T细胞持续活化的机制尚不清楚，成为艾滋病免疫致病机制中亟待阐明的关键问题。树突状细胞(Dendritic cell，DC)是人体免疫系统中功能最强的一种专职抗原呈递细胞(Antigen presenting cells，APC)，作为天然免疫细胞能够诱导天然免疫应答，并在连接天然免疫和获得性免疫中有重要的作用。树突状细胞是唯一能够活化初始的T细胞的抗原呈递细胞。DC主要分为类浆细胞样树突状细胞(Plasmacytoid dendritic cell，pDC)和髓样树突状细胞(Myeloid dendriticcell，mDC)二个亚群。pDC是树突状细胞的一个重要亚群，连接天然免疫反应和适应性免疫反应，在病毒刺激下能够产生大量的IFN-α，IFN-α可以限制HIV的感染，发挥直接的抗病毒活性。然而大量的证据显示，HIV感染者IFN-α活性增加也是持续免疫活化和免疫功能缺陷的一个原因。在HIV感染过程中外周循环pDC数量减少且功能缺陷，经过有效的抗病毒治疗也不能完全恢复。在急性和慢性HIV感染者中，由于HIV诱导pDC高度活化，尽管循环中pDC数量减少，IFN-α的产生却明显增加。那么，在AIDS疾病进展过程中，IFN-α发挥了有益的作用还是有害的作用？体外研究显示，被HIV活化的pDC能够产生吲哚胺2，3-二氧化酶（Indoleamine2，3-dioxygenase，IDO），正常情况下，IDO低水平表达，而在炎症或感染过程中其表达明显增加。IDO具有很强的抑制T细胞增殖的作用，在IDO的作用下初始CD4+T细胞分化成具有抑制免疫应答作用的调节性T细胞(regulatory T cells，Treg)。此外，pDC通过提呈抗原给T细胞，刺激T细胞活化，发挥适应性免疫反应。活化的T细胞能够促进pDC表达IDO，IDO通过降解局部色氨酸从而诱导对外源性的抗原耐受，发挥免疫调节和致免疫耐受功能。可溶性CD14(soluble CD14，sCD14)是天然免疫系统中的一个重要组成部分，是单核细胞活化的标志物，也是微生物移位的标志物，与多种疾病的发生发展密切相关。国外有研究报道，HIV感染者血清sCD14水平升高且与病情发展及病死率有关。CD40配体(CD40 Ligand，CD40L)主要表达于活化的T淋巴细胞表面，CD40L从活化的T细胞上脱落进入外周血称可溶性CD40L(sCD40L)。在慢性HIV感染中，sCD40L能够诱导DC表达IDO，同时也能够抑制pDC产生IFN-α，促进免疫活化。IDO通过诱导色氨酸分解代谢导致Th17/Treg比率失衡，有利于微生物移位。有研究显示，在HIV急性和慢性的感染者中，外周pDCs中IFN-α mRNA表达增加，并且血清中IFN-α水平显著升高。也有研究报道，HIV感染者经过有效的ART治疗后与未经ART治疗者比较，血浆IFN-α无显著变化。所以我们检测HIV感染不同时间血浆IFN-α水平，明确HIV感染不同时间血浆IFN-α含量。有文献报道，HIV感染者外周血单个核细胞、扁桃体、淋巴结等组织中IDO mRNA表达增加，但有关HIV感染者血浆IDO水平尚未见报道;也有文献报道，血浆sCD40L、sCD14水平升高，并且sCD40L水平与T细胞活化表面标志呈正相关。国内外研究显示，HIV感染者T细胞活化是一个多种因素参与的复杂过程，参与T细胞活化的血浆多种可溶性分子可能有多种。目前尚未见有关HIV感染者血浆IDO、IFN-α、sCD14水平与T细胞活化水平的相关性的报道。最近提出的HIV感染者免疫活化假说也提示体内T细胞活化在不同时间水平不同，因此提示我们要研究不同时间的IFN-α、IDO与T细胞活化关系。本文以HIV感染6个月内、1-2年，HAART治疗6个月、治疗1-2年者为研究对象，检测其血浆中IFN-α、IDO含量与CD4+T细胞、CD8+T活化水平，揭示IDO、IFN-α、sCD40L、sCD14含量与T持续细胞活化的相关性，对进一步阐明HIV感染疾病的致病机制有重要作用并为HIV的免疫治疗提供依据。　　方法：⑴选取HIV感染者血浆共77例，根据感染及治疗时间对其进行分组，其中HIV感染6个月内者28例，HIV感染1-2年者18例，入选标准:未接受HAART治疗，感染时间6个月内、1-2年者。HIV感染者治疗6个月13例，HIV感染者治疗1-2年者18例，入选标准:经过严格的HAART治疗6个月、1-2年者。77例HIV感染者均来自中国医科大学附属第一医院红丝带门诊，经免疫印迹试验确认为阳性，平均年龄为27.3（27.3±6.74）岁。健康对照组(Healthy Control，HC)22例，平均年龄28(22.5±3.35)岁，入选标准:HIV抗体阴性，血常规及肝肾功正常，乙型肝炎表面抗原及抗丙型肝炎抗体阴性，无免疫系统疾病，未暴露于HIV的正常人。纳入本课题研究的所有患者均签署了知情同意书，并通过了中国医科大学附属第一医院伦理委员会批准。⑵CD4+T细胞绝对值的检测。将20μl BD公司CD4/CD8/CD3 TriTEST试剂分别加入绝对计数管中，逆向加入50μl混匀的抗凝全血，室温避光染色15分钟，加入1×兔洗溶血素450μl，室温避光溶血15分钟，应用FACS Calibur流式细胞仪及MultiSET软件检测并分析得到CD4+T淋巴细胞的绝对值。⑶HIV病毒载量测定。取1ml EDTA抗凝血浆，采用Roche公司COBAS(@)AmpliPrep(@)/COBAS(@) TaqMan(@)System自动载量仪上以实时荧光定量PCR方法测定病毒载量。全部操作按照操作说明书进行。⑷检测血浆中IDO，IFN-α，sCD14，sCD40L。稀释血浆样本（sCD14稀释200倍，其余原倍），配制洗液、标准品、抗体、生物素。用ELISA kit检测IDO, IFN-α, sCD14, sCD40L浓度[IDO(cusabio), IFN-α(ebioscience), sCD40L(ebioscience)，sCD14(R&D system)]按照说明书方法进行检测。⑸统计学分析。应用SPSS17.0和G-raphPad5.0软件包进行统计分析和图形制作，符合正态分布的数据用均数表示，用方差分析(one-way AVOVA)进行不同组间的均值比较。不符合正态分布的用中位数表示。组间的比较采用T检验，相关性分析采用Spearman秩相关检验，P＜0.05为有统计学意义。　　结果：①HIV感染未经HAART治疗者血浆中IDO、sCD40L含量增加;IFN-α、sCD14含量无显著变化。HIV感染≤6个月和HIV感染1-2年未经HAART治疗者血浆中IDO、sCD40L含量显著高于健康对照组(P=0.0008，P=0.0007;P=0.0001，P=0.0032);而IFN-α、sCD14表达与健康对照组无显著差异。②HIV感染者经HAART治疗后血浆中IDO、sCD40L含量显著降低(P=0.0252，P=0.003);IFN-α含量无显著变化，sCD14含量显著高于健康对照组和未治疗患者组(P=0.0015，P=0.0113)。③HIV感染不同时间血浆IDO、IFN-α、sCD40L、sCD14相关性。HIV感染者血浆中IDO与IFN-α、sCD14无相关性;HIV感染≤6个月未经HAART治疗者血浆中IFN-α与sCD14呈正相关(P=0.03，r=0.4651);HIV感染1-2年未经HAART治疗者血浆中IDO与sCD40L呈正相关(P=0.0412，r=0.4853);HIV感染经HAART治疗1-2年者血浆中IDO与sCD40L呈正相关(P=0.0254，r=0.5245)。④HIV感染未经HAART治疗者T细胞活化水平增加。感染≤6个月者外周血中CD38+CD4+T细胞、CD38+HLA-DR+CD4+T细胞、CD38+CD8+T细胞、HLA-DR+CD8+T细胞、CD38+HLA-DR+CD8+T细胞百分数显著高于健康对照(P=0.0003，P=0.017，P＜0.0001，P=0.0002，P＜0.0001);感染1-2年者外周血中 CD38+CD4+T细胞、HLA-DR+CD4+T细胞、CD38+HLA-DR+CD4+T细胞、CD38+CD8+T细胞、HLA-DR+CD8+T细胞、CD38+HLA-DR+CD8+T细胞百分数显著高于健康对照(P＜0.0001，P=0.0241, P＜0.0001, P＜0.0001, P＜0.0001, P＜0.0001)。⑤HIV感染未经HAART治疗者血浆IDO、sCD40L与T细胞活化呈正相关。感染≤6个月者血浆中IDO的含量与T细胞活化呈正相关(P=0.057，r=0.5849)。感染1-2年者血浆中sCD40L含量与T细胞活化呈正相关(P=0.0353，r=0.5648)。⑥HIV感染者血浆IDO、IFN-α、sCD40L、sCD14与CD4+T细胞、病毒载量相关性。HIV感染≤6个月未经HAART治疗者血浆中sCD14的含量与CD4+T细胞数量呈负相关(P＜0.0001，r=-0.8913)，而IDO、IFN-α、sCD40L与CD4+T细胞数量无相关性;HIV感染1-2年未经HAART治疗者血浆中IDO的含量与CD4+T细胞数量呈负相关(P=0.021，r=-0.554)，而IFN-α、sCD40L、sCD14与CD4+T细胞数量无相关性;HIV感染者血浆中IDO、IFN-α、sCD40L、sCD14与病毒载量均无相关性。　　结论：⑴HIV感染不同时间血浆中IDO含量增加，HAART治疗后抑制IDO表达。⑵感染早期IFN-α与sCD14正相关，提示IFN-α在感染早期可能与微生物移位及单核细胞活化相关。⑶HIV感染者血浆中IDO和sCD40L的含量与T细胞活化具有相关性。