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目的:观察甲状腺素对气道上皮细胞黏蛋白(mucin,MUC)5AC表达的影响及其调控机制。方法:1、MUC5AC在A549细胞中的表达:体外培养A549细胞,以不同浓度的甲状腺素刺激A549细胞24h后,用ELISA法检测上清液中MUC5AC蛋白含量,用RT-PCR法检测细胞中MUC5ACmRNA水平。2、设计、构建MUC5AC基因5’上游序列的表达质粒:根据MUC5AC基因5’调控区的DNA序列、表达载体pGL3质粒的结构特点及实验需要设计PCR扩增引物,以人基因组总DNA为模板扩增MUC5AC基因5’非编码区片段,双酶切后插入pGL3质粒构成重组质粒。重组质粒经酶切和DNA测序鉴定证实构建成功后,用脂质体将表达质粒和内参照质粒共转染A549细胞,培养24h后,加入甲状腺素(浓度为6.5ng/ml)处理,继续孵育24h收集细胞,采用双荧光素酶报告基因检测系统测定报告基因的表达水平。结果:1、用ELISA法检测A549细胞培养上清液中MUC5AC蛋白的表达显示,甲状腺素可成浓度、时间依赖性地使A549细胞MUC5AC蛋白表达水平下降,与对照组比较差异有统计学意义。用RT-PCR法检测MUC5ACmRNA表达显示,甲状腺素处理组A549细胞MUC5ACmRNA相对表达量明显低于对照组。2、成功构建了4种含有MUC5AC基因启动子序列的表达质粒,分别导入A549细胞后予甲状腺素刺激,观察到甲状腺素可抑制重组质粒pGL3-MUC5AC-1330/+48、pGL3-MUC5AC-1250/+48荧光素酶的表达,而不能抑制重组质粒pGL3-MUC5AC-1200/+48、pGL3-MUC5AC-1020/+48荧光素酶的表达。结论:1、甲状腺素可抑制A549细胞黏蛋白MUC5AC基因转录及蛋白合成分泌,甲状腺素在基因转录水平抑制MUC5AC表达。2、成功地构建了四种含人MUC5AC基因启动子系列截短的荧光素酶报告基因表达质粒,为研究甲状腺素及其它因素对MUC5AC基因表达的调控奠定了基础。3、甲状腺素可抑制含有MUC5AC启动子5’-1330/+48、-1250/+48序列的报告基因质粒表达荧光素酶,而不能抑制含有该启动子5’-1200/+48、-1020/+48序列的报告基因质粒表达荧光素酶,表明甲状腺素调控MUC5AC基因表达依赖于启动子中-1250bp和-1200bp之间的序列。