扩展莫尼茨绦虫（Monieziaexpansa）属于扁形动物门（Platyhelminthes）、绦虫纲（Cestoda）、圆叶目（Cyclophyllidea）、裸头科（Anoplocephalidae）、莫尼茨属（Moniezia），主要寄生于草食性动物如：牛、羊、鹿及其它反刍动物小肠内。扩展莫尼茨绦虫病呈世界流行，在我国各地均有报道，尤其在新疆绵羊中流行广泛，主要影响幼畜的生长发育。扩展莫尼茨绦虫虫体体节由连续的节片构成，每个节片均为独立的，在整条虫体中可以找到不同发育时期的节片。扩展莫尼茨绦虫为雌雄同体，并具有发达的生殖系统，每个成熟节片都具有两套生殖系统。烯醇化酶（enolase）是生物代谢糖酵解过程中的关键酶，催化2-磷酸甘油酸转化为磷酸烯醇式丙酮酸，在生物体生长发育过程中有重要意义。随着烯醇化酶研究的逐步深入，发现该酶除在糖酵解过程中发挥作用外，还具有其它生物学功能，是一种多功能蛋白。为探索烯醇化酶在扩展莫尼茨绦虫生长、生殖过程中发挥的作用，作者开展了以下研究：　　1扩展莫尼茨绦虫烯醇化酶基因的克隆及序列分析　　根据GenBank中扩展莫尼茨绦虫烯醇化酶的表达序列标签（EST）设计一对特异性引物，提取扩展莫尼茨绦虫组织总RNA，运用RT-PCR扩增出烯醇化酶基因，将其克隆至pMD19-T载体，转化后挑取阳性菌落进行酶切和测序鉴定；采用生物信息学技术对获得的烯醇化酶基因进行序列分析。结果显示，经克隆获得的扩展莫尼茨绦虫烯醇化酶基因的cDNA序列长2122bp，包括1299bp的开放阅读框（ORF），编码432个氨基酸；蛋白的理论分子量为47.3269kDa，等电点为5.28；具有一个典型的烯醇化酶特征序列和一个烯醇化酶指纹序列，一个从内到外的跨膜区，多个潜在的磷酸化位点，亚细胞定位于细胞质，与细粒棘球绦虫和亚洲带绦虫的亲缘关系最近。　　2扩展莫尼茨绦虫烯醇化酶基因ORF的克隆、原核表达及分析　　为表达编码扩展莫尼茨绦虫的烯醇化酶基因，根据GenBank中登录的扩展莫尼茨绦虫烯醇化酶cDNA序列设计一对特异性引物，以扩展莫尼茨绦虫烯醇化酶基因全长质粒为模板，PCR扩增enolase基因ORF，并克隆到pMD18-T载体中进行序列测定，构建重组质粒pET28a-Enolase-ORF，转化至BL21（DE3）感受态细胞，以IPTG进行诱导表达。SDS-PAGE分析表达产物，通过亲和层析柱对重组蛋白进行纯化，Westernblot检测其抗原性。结果表明，重组烯醇化酶在大肠杆菌中高效表达，表达的融合蛋白相对分子量约为47kDa。Westernblot分析表明，天然蛋白能够被重组表达产物免疫SD大鼠的血清识别，出现两条免疫印记条带，即天然蛋白以两种形式（约47kDa和40kDa）存在，并具有抗原性，为该基因的功能研究和基因工程应用奠定基础。　　3绦虫石蜡切片的制作方法　　为了制作形态完整、结构清晰的绦虫成虫石蜡切片，详细观察其组织结构，选取扩展莫尼茨绦虫和贝氏莫尼茨绦虫两种绦虫成虫体节，用常规石蜡切片方法和改进石蜡切片方法分别进行制作。结果表明，两种方法均可获得完整性的切片，而改进石蜡切片方法制备理想切片的成功率是常规石蜡切片方法的5倍。结果为关于绦虫的教学和科研提供了资料。　　4Enolase在成熟扩展莫尼茨绦虫体节中的分布定位　　制作扩展莫尼茨绦虫体节（幼节、成节和孕节）的组织石蜡切片，应用免疫组织化学方法（SABC法），系统观察成熟扩展莫尼茨绦虫体节中烯醇化酶的分布情况。结果表明，Enolase在扩展莫尼茨绦虫虫体表膜呈免疫阳性反应，在虫体节间腺中也呈免疫阳性反应；幼节和成节中精巢呈Enolase阳性反应，输精管断面和储精囊也呈Enolase阳性反应，卵巢和孕节中大量虫卵均呈Enolase阴性反应。本文讨论了Enolase在虫体与宿主相互作用过程中可能发挥重要作用，及Enolase直接或间接的参与精子的发生与分化和虫体的生长繁殖过程。