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背景与目的: 乳腺癌是一种女性常见的恶性肿瘤,发病率逐年增加且发病趋于低龄化,乳腺癌现已成为女性恶性肿瘤发病率最高的肿瘤。在我国,乳腺癌的发病以惊人的速度增长,现已成为我国女性恶性肿瘤的首位。乳腺癌不仅给发病患者带来了身体上巨大创伤,同时也给其所在的家庭造成非常大的经济压力。因此,如何提高乳腺癌治疗的临床疗效已成为医学界关注的热点问题。传统治疗主要采用化疗、放疗等手段,在一定程度上确实可以控制癌病的发展,但同时亦对正常细胞产生杀伤作用,降低机体的免疫功能,更有甚者可导致严重的并发症。中医药做为我国的国粹,在许多难治性疾病上发挥着其独特的疗效,在肿瘤的防治上有着独特的优势。目前,越来越多的研究着眼于从中药中研发新的治疗药物以及探讨其治疗机制。 白花丹素,传统中药白花丹的主要活性成分,是一种萘醌类化合物,化学式为C11H8O3,化学名为5-羟基-2-甲基-1,4-萘醌,主要药理作用有抗炎、抗菌、抗氧化、抗癌等。国外研究证明白花丹素对多种肿瘤细胞,如前列腺癌、肺癌、宫颈癌、肝癌、胰腺癌等均有显著的治疗作用,且未见明显的毒副作用。白花丹素对乳腺癌的治疗作用及相关机制却鲜有报道,本研究旨在探讨白花丹素对人乳腺癌细胞MCF-7的的作用及其机理,为白花丹素用于乳腺癌的临床治疗提供理论依据。 方法: 0.1μg/mL、1μg/mL、10μg/mL的白花丹素作用于人乳腺癌MCF-7细胞24h、48h和72h,MTT比色法分析白花丹素对MCF-7细胞增值抑制作用;Annexin V-FITC染色流式细胞仪检测0.1μg/mL、1μg/mL、10μg/mL白花丹素作用MCF-7细胞24h后对细胞凋亡的影响;0.1μg/mL、1μg/mL、10μg/mL的白花丹素作用MCF-7细胞24h后,PI单染法流式细胞术检测细胞周期的分布,荧光定量PCR SYBR Green法检测细胞周期调控因子CyclinD1、CyclinE、p21及p53转录水平的表达,Western blot检测上述周期蛋白的表达;0.1μg/mL、1μg/mL、10μg/mL的白花丹素作用MCF-7细胞24h后,荧光定量PCR SYBR Green法检测细胞凋亡因子Bcl-2、Bcl-xl、Bax、Bak转录水平的表达,Western blot检测上述凋亡蛋白的表达。 结果: 通过本实验研究,发现: (1)0.1μg/mL、1μg/mL、10μg/mL的白花丹素作用于人乳腺癌MCF-7细胞24h、48h和72h,MTT比色法分析显示,白花丹素可以直接抑制人乳腺癌细胞MCF-7的增殖,并呈时间和剂量依赖性。 (2)0.1μg/mL、1μg/mL、10μg/mL的白花丹素作用MCF-7细胞24h后,通过PI单染流式细胞仪分析,白花丹素诱导人乳腺癌MCF-7细胞阻滞于G1期,成剂量依赖性。 (3)人乳腺癌MCF-7细胞经过不同剂量的白花丹素处理24h后,各剂量的白花丹素组均出现不同程度的凋亡,且细胞的凋亡比例在早期呈现随剂量增高而增长的态势,各剂量的白花丹素早期凋亡率与正常对照组比较,差异均具有统计学意义(P<0.05)。 (4)0.1μg/mL、1μg/mL、10μg/mL的白花丹素作用MCF-7细胞24h,Real-time PCR显示白花丹素在转录水平可以下调细胞周期因子CyclinD1和CyclinE的表达,上调p21和p53的表达,呈剂量依赖性,Western blot检测显示白花丹素可上调p21和p53蛋白的表达,下调CyclinD1和CyclinE蛋白的表达,呈剂量依赖性,提示白花丹素可能通过ATM-p53-p21信号通路诱导MCF-7细胞G0/G1期周期阻滞。 (5)0.1μg/mL、1μg/mL、10μg/mL的白花丹素作用MCF-7细胞24h,Real-time PCR显示白花丹素在转录水平可以下调细胞Bcl-2和Bcl-xl的表达,上调Bax和Bak的表达,呈剂量依赖性,Western blot检测显示白花丹素可上调Bax和Bak蛋白的表达,下调Bcl-2和Bcl-xl蛋白的表达,呈剂量依赖性,提示白花丹素可能通过线粒体途径诱导MCF-7细胞凋亡。 结论: 白花丹素对人乳腺癌细胞MCF-7具有明显的抗增殖作用,通过上调p21和p53的表达,下调CyclinD1和CyclinE的表达来调控细胞周期,将MCF-7细胞阻滞于G1期,阻止DNA的合成。白花丹素通过上调Bax和Bak蛋白,下调Bcl-2和Bcl-xl蛋白的表达,通过线粒体途径诱导细胞凋亡。