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新生血管眼底疾病是导致失明的重要原因之一。目前,临床上针对新生血管眼底疾病的治疗方式主要包括两大类:激光光凝术等手术方式和抗VEGF治疗等药物干预方式,这些治疗方式的运用能一定程度上延缓疾病的发展,但仍有大量患者存在不良反应或治疗无效的现象。因此,探索眼底病理性新生血管新的发病机制及相应的治疗方式具有重要的临床意义。本论文围绕新生血管眼底疾病的治疗,分别从疾病模型的优化、疾病发病机制及疾病治疗新策略的探索进行深入剖析,为提出新的临床治疗手段奠定了理论基础。其主要内容包括三个部分:1.设计了一种手持式小鼠固定器,并优化了激光诱导的脉络膜新生血管（choroidal neovascularization,CNV）模型参数。激光诱导的CNV模型模拟了新生血管性老年黄斑变性的普遍特征,是被广泛认可的CNV动物模型之一。但其造模过程操作复杂,需要长时间训练才能保证诱导成功率和激光斑均一性,这限制了该模型在药物疗效评估中的适用性。我们首次设计了一种手持式小鼠固定器,并邀请了6名眼科住院医生学习激光诱导CNV小鼠模型造模技术,通过对掌握建模方法的学习时间进行评估,我们发现利用该固定器能显著缩短掌握建模方法的平均学习时间,并能有效减轻操作过程中生理和心理的疲劳程度。另一方面,我们邀请了1名精通激光诱导小鼠CNV造模技术的操作者使用固定器进行造模。与不使用固定器相比,我们发现使用固定器能显著缩短完成单只小鼠造模所需时长、提高CNV诱导的成功率和CNV激光斑的均一性。以上结果表明,该手持式小鼠固定器能优化CNV小鼠模型的方法,为进一步新生血管眼底疾病治疗研究提供了理论和实验基础。2.探索了CD146作为新生血管眼底疾病治疗靶点的新方案。CD146是生理性血管形成和肿瘤等病理性血管生成的关键因子,在上述实验基础上,我们进一步围绕黏附分子CD146在缺氧引发的新生血管眼底疾病中的作用展开了研究。我们的研究表明,与正常小鼠视网膜相比,在激光诱导的CNV小鼠和氧诱导视网膜病变（oxygen-induced retinopathy,OIR）小鼠视网膜中CD146表达均升高,并主要聚集在异常新生血管部位,因此我们推测CD146分子在眼底病理性新生血管中被异常激活。在人视网膜内皮细胞（Human retinal endothelial cells,HRECs）中过表达CD146,可导致缺氧诱导的细胞管腔形成能力和细胞迁移能力提高,这些表型在敲除CD146的HRECs中得到明显改善,以上结果提示CD146在缺氧诱导的眼底血管新生中起着关键作用,CD146缺失将导致新生血管生成受阻。这一假说在血管内皮特异性敲除Cd146(Cd146EC-KO)的OIR小鼠模型中得到了验证,即经诱导后Cd146EC-KO小鼠眼底病理性新生血管发生率显著低于野生型小鼠。因此,我们进一步以CD146为治疗靶点,评估了其特异性抗体AA98对眼底病理性新生血管是否存在抑制作用。体外实验结果表明,经AA98处理后,缺氧诱导的HRECs细胞管腔形成能力和细胞迁移能力显著降低。体内实验结果证实,预防性或治疗性地玻璃体注射AA98,均可有效降低激光诱导的CNV小鼠和OIR小鼠眼底病理性新生血管的发生,减少血管的渗漏。此外,我们发现CD146特异性抗体AA98与血管内皮生长因子（vascular endothelial growth factor,VEGF）特异性抗体Bev对血管新生下游信号通路的抑制作用既有重叠又相互独立,两者联合使用对新生血管的抑制作用显著加强,表明抗CD146治疗和抗VEGF治疗在新生血管眼底疾病中具有联合应用价值。以上结果为新生血管眼底疾病提供了新的治疗靶点,并提出了抗CD146及抗VEGF联合治疗新方式。3.提出了利用氧化还原调控纳米酶进行新生血管眼底疾病治疗的新策略。针对视网膜病理性新生血管存在缺氧引发的氧化还原失衡现象,我们设计了一种具有抗氧化损伤功能的Pt@Mito Lipo纳米酶,并探索了其在新生血管眼底疾病中的治疗价值。该纳米酶主要由具有线粒体靶向功能的三苯基膦（triphenylphosphine,TPP）基团修饰的脂质体外壳和铂（Pt）纳米酶内核组成,在中性环境中具有超氧化物歧化酶（superoxide dismutase,SOD）酶活性和过氧化氢酶（catalase,CAT）活性。在体外实验中,我们发现Pt@Mito Lipo纳米酶能消除细胞内的活性氧（reactive oxygen species,ROS）累积,减轻线粒体损伤;同时可生成O2缓解细胞缺氧,因此我们推测其具有抑制新生血管的潜能。在进一步的体内实验中,我们发现纳米酶能有效减少视网膜新生血管的发生,同时还能加速生理性血管的修复,而这种治疗作用正是通过缓解细胞氧化损伤,纠正了视网膜血管缺氧实现的。缺氧环境的改善修正了VEGF信号通路的异常激活,纠正了小鼠视网膜血管尖端细胞数量丢失、丝状伪足量少等现象,从而预防了视网膜血管以病理性状态生长,使其以正常形态进行修复。此外,我们对Pt@Mito Lipo纳米酶的生物安全性进行了测试,结果表明其对发育中小鼠及成年小鼠的血管密度及感光细胞均不存在损伤作用,具有良好的生物安全性。以上结果提出了一种通过氧化还原调控治疗新生血管眼底疾病的新方式,为缺氧诱导的新生血管眼底疾病提供了纳米酶治疗新策略。综上,本论文分别从疾病模型的优化及疾病发病机制、治疗新策略的探索进行深入剖析,为探寻新生血管眼底疾病新的治疗方式奠定了理论基础。