【摘 要】
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卵巢癌是女性生殖系统最常见的恶性肿瘤之一,其发病率仅次于宫颈癌和子宫内膜癌,但死亡率位居第一。近年来,卵巢癌的发病率逐年升高,且出现年轻化的趋势。紫杉醇是治疗卵巢癌的一线药物,大多数卵巢癌患者初次接受紫杉醇化疗有较好的疗效,但随着紫杉醇化疗次数增加,治疗后期往往会出现紫杉醇耐药,导致患者死亡。耐药是卵巢癌高死亡率的重要因素之一。PTN（Pleiotrophin）基因是一种原癌基因,该基因的表达产物
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卵巢癌是女性生殖系统最常见的恶性肿瘤之一,其发病率仅次于宫颈癌和子宫内膜癌,但死亡率位居第一。近年来,卵巢癌的发病率逐年升高,且出现年轻化的趋势。紫杉醇是治疗卵巢癌的一线药物,大多数卵巢癌患者初次接受紫杉醇化疗有较好的疗效,但随着紫杉醇化疗次数增加,治疗后期往往会出现紫杉醇耐药,导致患者死亡。耐药是卵巢癌高死亡率的重要因素之一。PTN（Pleiotrophin）基因是一种原癌基因,该基因的表达产物是由136个氨基酸组成的高度保守的蛋白质。研究发现多效生长因子PTN有许多生物学功能,如促进血管生成、细胞增殖和迁移、有丝分裂、骨发育、神经系统发育、抗凋亡等。PTN在胚胎和新生儿发育过程中高度表达,成年后仅在卵巢、睾丸、大脑等部位有表达。PTN还在卵巢癌、直肠癌、胰腺癌、肺癌、乳腺癌等多种肿瘤中高度表达,这表明PTN与肿瘤的发生发展可能有重要的联系。研究显示卵巢癌发病机制可能和PTN及其受体有关。另有研究证明,PTN与其他肿瘤耐药密切相关。因此,研究PTN与卵巢癌紫杉醇耐药的关系,对卵巢癌的基础研究和临床治疗具有重要意义。本实验利用实验室自制的PTN蛋白免疫BALB/C小鼠,制备PTN单抗,并用于文中其他实验。A2780和SKOV-3细胞中加入梯度浓度的PTN蛋白,48 h后计数,绘制生长曲线,发现PTN可以促进A2780和SKOV-3细胞生长（P＜0.05）。梯度浓度的紫杉醇作用的A2780和SKOV-3细胞中加入PTN,MTT结果显示,加入PTN后紫杉醇对A2780和SKOV-3细胞的抑制率显著降低,即PTN可以降低A2780和SKOV-3细胞对紫杉醇的敏感（P＜0.01）。紫杉醇给药的A2780和SKOV-3细胞中加入不同浓度的PTN,观察细胞凋亡。实验结果显示,PTN可以降低二者的总凋亡率,且表现出一定的浓度依赖性（P＜0.05;P＜0.01）。A2780和SKOV-3细胞中转染sh-PTN-1、sh-PTN-2及sh-NC质粒,通过PCR以及western blot发现二者均有较好的干扰作用（P＜0.05;P＜0.01）。为了进一步探究PTN蛋白对卵巢癌细胞紫杉醇耐药性的影响,转染sh-PTN-1和sh-NC质粒的A2780和SKOV-3细胞中加入相同浓度梯度的紫杉醇,MTT结果显示,与Control组相比,转染sh-PTN-1的A2780和SKOV-3细胞组的抑制率升高（P＜0.05）,PTN表达沉默后A2780和SKOV-3细胞对紫杉醇更加敏感。进一步的凋亡实验显示,紫杉醇诱导转染sh-PTN-1质粒的A2780和SKOV-3细胞的总凋亡率比Control组有明显的增加（P＜0.05;P＜0.01）,表明PTN有一定的抗凋亡作用。转染sh-PTN-1质粒的A2780和SKOV-3细胞加入紫杉醇,通过western blot检测Cleaved PARP的表达量。结果显示,转染sh-PTN-1的细胞组Cleaved PARP的表达量更高（P＜0.05;P＜0.01）,说明PTN有一定的抗凋亡作用,PTN可以增强卵巢癌细胞对紫杉醇的耐药性。PTN可以促进卵巢癌细胞A2780和SKOV-3的增殖,减弱紫杉醇对卵巢癌细胞的抑制,降低紫杉醇引起的卵巢癌细胞的凋亡。PTN可以提高卵巢癌细胞对紫杉醇的耐药性。
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