溶藻弧菌肽聚糖对凡纳滨对虾常用免疫指标、虾青素含量和LvLT基因表达的影响

来源 :广东海洋大学 | 被引量 : 2次 | 上传用户:wangkaihao_2008
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本实验从溶藻弧菌中提取得到其多糖成分肽聚糖,并对肽聚糖的结构和化学组分进行测定,进一步证实所得到的成分为肽聚糖,并用所提取得到的肽聚糖对凡纳滨对虾进行免疫刺激,对凡纳滨对虾常用免疫指标、机体内虾青素的含量以及C-型凝集素LvLT基因的表达进行测定,同时分析所测定的免疫指标与虾青素含量、凝集素LvLT基因表达之间的相关性,具体研究结果如下:1.从溶藻弧菌中提取肽聚糖的得率为6.43%,肽聚糖的含量为98.1%,在进一步对其化学成分和结构测定的研究表明:肽聚糖中蛋白质含量为38.2%,总糖的含量为34.4%,总脂的含量为2.8%;其结构从傅里叶红外光谱图可以看出在3283.32cm-1,2962.33cm-1,2929.68cm-1,2874.85cm-1,1625.46cm-1,1532.9cm-1,1171.61cm-1,1046.73cm-1出现吸收峰,具备了肽聚糖相应的特征吸收峰。2.用浓度为0.05mg/mL、0.1mg/mL和0.15mg/mL的溶藻弧菌肽聚糖对凡纳滨对虾进行注射免疫刺激,并对其常用免疫指标和免疫保护率进行测定,结果表明:溶藻弧菌肽聚糖对血清中血细胞数量、酚氧化酶活力(PO)、一氧化氮合成酶活力(NOS)、超氧化物歧化酶活力(SOD)有极显著性影响(P<0.01),其中0.05mg/mL组、0.1mg/mL组和0.15mg/mL组血细胞数量分别在24h、6h和6h达到最大值,PO活力分别在72h、72h和96h达到最大值,NOS活力在12h、72h和24h达到最大值,SOD活力在48h、72h和24h达到最大值;各处理组在出现最大值之后,随着时间延长而逐渐趋于对照组的水平;免疫保护率0.05mg/mL组为40.0%,0.1mg/mL组为53.33%,0.15mg/mL组为66.67%,免疫保护率随着浓度的增加而增大。3.用浓度为0.5mg/mL、1.0mg/mL和1.5mg/mL的溶藻弧菌肽聚糖对凡纳滨对虾进行浸泡免疫刺激,并对其常用的免疫指标和免疫保护率进行测定,结果表明:溶藻弧菌肽聚糖对血清中血细胞数量、酚氧化酶活力(PO)、一氧化氮合成酶活力(NOS)、超氧化物歧化酶活力(SOD)有显著性(P<0.05)的差异影响;其中0.5mg/mL组、1.0mg/mL组和1.5mg/mL组血细胞数量分别在48h、48h和24h出现最大值,PO活力分别在48h、24h和96h出现最大值,NOS活力分别在48h、24h和48h出现最大值,SOD活力分别在12h、24h和48h出现最大值;各处理组在出现最大值之后,也随着时间延长而逐渐趋于对照组的水平;其免疫保护率0.5mg/mL组为33.33%,1.0mg/mL组为36.67%,1.5mg/mL组为50.00%,免疫保护率随着浓度的增加而增大。4.用肽聚糖对凡纳滨对虾进行免疫刺激后,对肝胰腺中C型凝集素LvLT基因表达的情况进行测定,其实验结果显示:注射和浸泡各个浓度处理组都出现了极显著性差异影响(P﹤0.01),其中注射浓度为0.05mg/mL组、0.1mg/mL组和0.15mg/mL组基因上调出现最大值所需时间分别为24h、12h和6h,各组在出现最大值后都有逐渐下调的趋势;浸泡浓度为0.5mg/mL组、1.0mg/mL组和1.5mg/mL组基因上调出现最大值所需时间分别是12h、24h和6h,各组在出现最大值后也同样有逐渐下调的趋势,但是在120h后有出现上调的趋势。5.用Spearman相关系数对凡纳滨对虾C-型凝集素LvLT基因表达与各测定的免疫指标的相关性进行分析,分析的结果显示:注射组Spearman相关系数,LvLT基因表达与血细胞数量、SOD活力和PO活力相关性差异极显著(P﹤0.01),NOS活力差异不显著。浸泡组Spearman相关系数,LvLT基因表达与血细胞数量、NOS活力、PO活力以及SOD活力相关性差异极显著(P﹤0.01);说明了LvLT基因表达与血细胞数量,SOD活力与PO活力关系很密切。6.用肽聚糖对凡纳滨对虾进行免疫刺激后,虾青素含量变化情况如下:注射和浸泡各个浓度组虾青素含量变化与对照组相比出现了极显著性的变化(P﹤0.01);其中注射各处理组在24h内上升到最大值,然后逐渐的减小,0.05mg/mL组和0.15mg/mL组在96h后出现上升的趋势,而0.1mg/mL组在120h后出现上升的趋势,各处理组的含量都相对比对照组的低,其变化的趋势与SOD活力的变化趋势相似;浸泡浓度为0.5mg/mL组、1.0mg/mL组和1.5mg/mL组分别在24h、48h和48h出现最大值,然后逐渐减小,在120h后出现上升的趋势。7.虾青素含量与各测定的免疫指标之间关系进行相关性分析结果显示:注射组Spearman相关系数虾青素的含量与SOD活力、PO活力和LvLT基因表达差异极显著(P﹤0.01),与血细胞数量差异显著(P﹤0.05),与NOS活力不显著;浸泡组Spearman相关系数虾青素的含量与NOS活力和LvLT基因表达差异极显著(P﹤0.01),与PO活力差异显著(P﹤0.05),与SOD活力和血细胞数量不显著;说明虾青素的水平与SOD活力,PO活力和LvLT基因表达关系密切。
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