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针对蛋鸡产蛋高峰后期蛋壳厚度变薄和蛋壳强度变弱这一严重影响鸡蛋运输、加工及养殖经济效益的问题,本论文开展了蛋鸡饲粮中添加蛋氨酸锌调控蛋壳品质的机理研究。首先通过研究蛋氨酸锌对蛋鸡生产性能、蛋品质、抗氧化性能和免疫性能等方面的影响确定了蛋氨酸锌在蛋鸡日粮中应用改善蛋壳品质的效果及其适宜添加水平;并从蛋氨酸锌在体内吸收转运着手,体内与体外试验相结合,研究了其调控蛋壳品质的机理。丰富了氨基酸螯合锌在蛋禽上的营养代谢理论,为有机微量元素氨基酸螯合锌在蛋鸡饲料中的合理应用提供科学依据。本研究主要结果如下:1蛋鸡产蛋高峰后期蛋氨酸锌的适宜添加量研究本试验旨在研究相比于添加无机锌,蛋鸡产蛋高峰后期蛋氨酸锌的适宜添加量。选49周龄的京红1号蛋鸡720羽,随机分成6个组（6个重复/组,20羽/重复）:对照组（添加80 mg Zn/kg硫酸锌（ZnSO4））,5个试验组（添加20、40、60、80 和 100 mg Zn/kg 蛋氨酸锌（Zn-Met））。结果表明:80 mg/kg Zn-Met组的采食量和料蛋比都显著低于对照组（P<0.05）;80、100 mg/kg Zn-Met组的胰脏、肾脏和肝脏中锌含量显著高于对照组（P<0.05）;60、80 mg/kg Zn-Met组的十二指肠、空肠和回肠的绒毛高度和绒毛面积都显著高于对照组（P<0.05）;80、100 mg/kg Zn-Met组回肠中免疫球蛋白M（IgM）水平、肝脏中过氧化氢酶（CAT）水平均显著高于对照组（P<0.05）,60 mg/kg Zn-Met组血清中总抗氧化能力（T-AOC）、谷胱甘肽过氧化物酶（GSH-Px）水平、肝脏中T-AOC、铜锌超氧化物歧化酶（CuZnSOD）和GSH-Px水平均显著高于于对照组（P<0.05）;100 mg/kg Zn-Met组血清中总蛋白（TP）含量显著高于对照组（P<0.05）;鸡蛋在放置 15 d 后,60、80 mg/kg Zn-Met 组蛋重、80、100 mg/kg Zn-Met 组蛋白高度、100 mg/kg Zn-Met组哈氏单位均显著高于对照组（P<0.05）;80 mg/kg Zn-Met组蛋壳乳突体宽度和血清Ca2+浓度显著低于对照组,栅栏层厚度、血清中碱性磷酸酶（AKP）水平和蛋壳腺（ESG）中碳酸酐酶（CA）活性显著高于对照组（P<0.05）。结果提示:本试验条件下,蛋鸡饲粮中Zn-Met的适宜添加水平为 60～80 mg/kg。与 80 mg/kg ZnSO4 组对比,80 mg/kg Zn-Met 组可以降低蛋鸡料蛋比,延长鸡蛋保质期,改善肠道形态,提高免疫和抗氧化功能。2蛋氨酸锌对蛋鸡蛋壳品质的调控机理研究2.1蛋氨酸锌在蛋鸡小肠和肝脏中吸收转运特点本试验旨在研究Zn-Met在蛋鸡小肠和肝脏中吸收转运特点。选38周龄的海兰灰蛋鸡288羽,随机分成3个组（6个重复/组,16羽/重复）:空白对照组（不额外添加任何形式的 Zn）,Zn-Met（80 mg Zn/kg）组和ZnSO4（80 mg Zn/kg）组。结果表明:相比于对照组和ZnSO4组,Zn-Met组显著提高肝脏、十二指肠和空肠中锌含量以及空肠中的绒毛高度、绒毛面积和绒隐比,显著降低隐窝深度（P<0.05）;Zn-Met组十二指肠中金属硫蛋白（MT）、肝脏中金属反应元件结合转录因子1（MTF-1）mRNA表达水平显著高于对照组（P<0.05）;Zn-Met组提高了空肠中B0中性氨基酸转运载体（B0AT1）、十二指肠中L型氨基酸转运载体（LAT1）mRNA表达水平（P<0.05）。结果提示:与ZnSO4组对比,Zn-Met组能够改善空肠的肠道形态以及十二指肠中MT和LAT1、肝脏中MTF-1、空肠中B0AT1 mRNA的表达,从而提高组织和肠道中锌含量。2.2蛋氨酸锌调控蛋鸡蛋壳品质的机理研究在饲养试验基础上,研究Zn-Met对蛋鸡蛋壳的表观参数、超微结构、血清生化指标和壳基质蛋白基因表达的影响,同时利用能量色散X射线光谱仪对蛋壳横截面上钙元素含量和分布进行分析,从而探讨Zn-Met对蛋壳品质的调控机理。结果显示:在试验第10周时,Zn-Met组蛋重显著高于对照组且蛋壳强度和蛋壳厚度显著高于对照组和ZnSO4组（P<0.05）;Zn-Met组显著增加了内表面纤维直径,降低了乳突体宽度（P<0.05）,且Zn-Met组蛋壳强度与乳突体宽度呈显著性负相关（P<0.01,r2=0.5032）;相比于对照组和ZnSO4组,Zn-Met组蛋壳中Ca原子重量百分比最高,且在蛋壳横截面上线分布的Ca信号强度更强,面分布上Ca更加均匀、致密;Zn-Met组蛋黄和血清中锌含量显著高于对照组和ZnSO4组（P<0.05）,而蛋白、蛋壳、卵巢、膨大部和ESG中锌含量显著高于对照组（P<0.05）;Zn-Met组血清中CA、AKP活性和ESG中Ca2+、白蛋白（ALB）浓度以及CA、钙结合蛋白-d28k（CaBP-D28k）mRNA表达水平在各组间最高（P<0.05）。结果提示:Zn-Met可通过提高血清中CA、AKP活性以及ESG中Ca2+浓度和CA、CaBP-D28k mRNA表达水平改善蛋壳微观结构,降低乳突体宽度,促进蛋壳中钙的沉积且均匀分布,从而增强蛋壳厚度和蛋壳强度。2.3蛋鸡子宫内膜上皮细胞模型的建立本实验选取产蛋高峰期蛋鸡对其子宫部进行原代分离,刮取子宫内膜后,采用Ⅰ型胶原酶消化60min。采用CCK 8试剂盒检测细胞增殖。结果显示:通过Ⅰ型胶原酶消化分离得到的子宫内膜上皮细胞贴壁生长较好;在培养2-5 d细胞达到对数生长期,第7d进入平台期。结果提示:通过刮取法分离和Ⅰ型胶原酶消化可以得到生长较好的子宫内膜上皮细胞。2.4体外研究蛋氨酸锌对蛋壳品质相关基因表达的影响本研究建立蛋鸡子宫内膜上皮细胞模型,体外培养蛋鸡子宫内膜上皮细胞,探讨Zn-Met对体外培养蛋鸡子宫内膜上皮细胞蛋壳品质相关基因表达的影响。细胞培养第3d,添加0、25、50、100、200和400μM的Zn-Met或ZnSO4分别处理24 h或48 h。结果显示:细胞活力在50 μM Zn浓度下处理24 h达到最大值;在50 μM Zn浓度（Zn-Met或ZnSO4）处理细胞24h后,Zn-Met组细胞内Ca2+浓度和MT mRNA表达水平显著高于对照组（P<0.05）。结果提示:Zn-Met可以提高体外培养的子宫内膜上皮细胞内Ca2+浓度以及促进其MT mRNA的表达。综上所述,本试验条件下,蛋鸡饲粮中添加Zn-Met可降低料蛋比,延长鸡蛋保质期,提高免疫和抗氧化功能,其适宜添加水平为60～80 mg/kg;Zn-Met通过改善肠道形态、增强小肠和肝脏中相关锌转运载体mRNA的表达,促进锌的吸收提高组织和肠道中锌含量;Zn-Met通过提高血清中CA、AKP活性以及ESG中Ca2+浓度和CA、CaBP-D28k mRNA表达水平改善蛋壳微观结构,降低乳突体宽度,促进蛋壳中钙的沉积和分布,增强蛋壳厚度和强度。