本研究的目的是构建马铃薯S病毒外壳蛋白基因的原核表达载体，使其在大肠杆菌中高效表达，用表达的融合蛋白作为抗原制备抗血清，为进一步制备马铃薯S病毒的ELISA检测试剂盒打基础。 　　用PVS-cp基因的上、下游引物及pGEM-pvs模板进行PCR扩增，琼脂糖凝胶电泳显示扩增产物为一条分子量约为890bp的特异条带。用Ultrafree-DA试剂盒一步离心法回收890bp的特异扩增片段，然后与T表达载体pBAD/Thio连接，重组质粒转化受体菌TOP10。经氨苄青霉素抗性筛选、质粒电泳检测、PCR扩增及SphI与PstI限制性内切酶的单酶切和双酶切鉴定，筛选到了阳性克隆，相应的重组质粒被命名为pBAD-pvs。单独使用基因的引物或混合使用基因及载体的引物进行PCR检测，获得了目的基因正向插入表达载体的目的克隆，对应的重组质粒命名为pBAD-pvs+。 　　重组质粒pBAD-pvs+中外源基因是受阿拉伯糖启动子控制表达的。在42℃，TOP10(pBAD-pvs+)用2％阿拉伯糖诱导培养4小时后，SDS-PAGE凝胶电泳显示表达产物中有一条分子量为46KDa的特异性蛋白条带，其大小与预期的融合蛋白相符，该蛋白在总蛋白中的含量为20.22％。在硝酸纤维素膜上进行Westernblotting分析，结果显示该融合蛋白与PVS-IgG有反应，形成明显的杂交带，表明该融合蛋白是PVS-cp嵌合基因正确表达的产物。 　　用溶菌酶破碎菌体，提取总蛋白，SDS-PAGE显示表达的融合蛋白主要以包涵体的形式存在。经4M尿素洗涤后的包涵体蛋白，用超纯水4℃过夜溶解，SDS-PAGE显示得到了只含有该融合蛋白的水溶液，即建立了纯化该融合蛋白比较简便的方法。经洗涤后的包涵体蛋白用6M尿素溶解，在氧化型和还原型谷胱甘肽存在的条件下复性，电泳显示得到了该融合蛋白纯度较高的水溶液。两种途径获得的蛋白溶液经浓缩透析后作为制备抗血清的抗原。 　　除采用上述两种蛋白溶液外，含目的蛋白的SDS-PAGE胶条经液氮研磨后的粉末也作为抗原。三种抗原同时免疫家兔，制备出了三种抗血清。琼脂糖双向扩散检测显示，三种来源的抗血清与抗原均能形成明显的沉淀线，其中用研磨后的粉末作抗原得到的抗血清效价为1：256，其它两种抗血清的效价为1：128。结果显示获得了目的蛋白的特异性抗血清，大肠杆菌表达的该融合蛋白具有良好的免疫原性与反应原性。