胸腺素β4对大鼠深Ⅱ度烫伤创面愈合影响的实验研究

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目的研究外用胸腺素β4对大鼠深Ⅱ度烧伤创面愈合的影响,初步探讨胸腺素β4在大鼠深Ⅱ度烧伤创面愈合中的作用机制,为应用胸腺素β4治疗烧伤创面提供实验依据。方法第一部分不同浓度胸腺素β4对大鼠深Ⅱ度烫伤创面愈合的影响选择240-260g SD大鼠128只,雌雄不限,按随机数字表分成四组,分别为对照组、低浓度组(60mg/L)、中浓度组(120mg/L)及高浓度组(240mg/L),每组32只,将大鼠用10%水合氯醛按400mg/Kg剂量腹腔麻醉后,取直径为3cm试管,盛装91℃的热水烫其背部8秒钟[1-3],制作一个直径3.0cm圆形深Ⅱ度烫伤创面,烫伤后对照组滴加0.9%生理盐水0.1ml,低、中、高浓度组分别滴加60mg/L、120mg/L和240mg/L的胸腺素β4各0.1ml,每日一次。创面均采用无菌纱布包扎和透气薄膜固定,隔日换药一次。烫伤第7天、14天和21天测量创面面积以计算创面愈合率;切取创面组织块HE染色后进行组织学观察;碱水解法测定羟脯氨酸含量变化以及免疫组织化学法检测CD34表达,观测CD34阳性血管密度,同时记录各组愈合时间。数据采用SPSS18.0统计软件包进行方差分析,P<0.05认为有统计学意义。第二部分胸腺素β4对大鼠深Ⅱ度烫伤创面bFGF和VEGF表达的影响另选240-260g SD大鼠32只,雌雄不限,选用直径为2.5cm的试管按第一部分造模方法在每只大鼠背部左右两侧各制作一处深Ⅱ度烫伤创面,采用自身对照法设计右侧创面为实验组,左侧创面为对照组。实验组创面滴加120mg/L胸腺素β4(通过第一部分实验结果得知最佳浓度为120mg/L),对照组滴加0.9%生理盐水,创面均采用无菌纱布包扎。烫伤后第1天创面开始用药,每个创面每次剂量为0.1ml,每日一次,两组均隔日同时换药。分别在烫伤第7天、14天和21天计算创面愈合率,在烫伤后第3天、7天、14天和21天,每组各处死5只大鼠,取创面中心组织HE染色后观察组织形态学变化;免疫组织化学法检测碱性成纤维细胞生长因子(basic fibroblast growth factor,bFGF)及血管内皮细胞生长因子(vascular endothelial growth factor,VEGF)表达情况,Image Pro Plus软件测量它们光密度(Integral Optial Desity,IOD)值。同时观测创面愈合情况。实验数据采用spss18.0软件包进行配对t检验分析,P<0.05认为有统计学意义。结果第一部分不同浓度胸腺素β4对大鼠深Ⅱ度烫伤创面愈合的影响1.创面愈合率:不同浓度胸腺素β4实验组在每个时间点创面愈合率均高于对照组,其中以中浓度(120mg/L)组最为明显,组间差异有统计学意义,P<0.05。2.愈合时间:胸腺素β4各组均少于对照组,其中以中浓度组最为明显,具有统计学意义,P<0.05。3.组织学观察:不同浓度胸腺素β4实验组组织毛细血管、成纤维细胞和胶原纤维均较对照组多,炎性细胞较对照组少,上皮化速度较对照组快,其中以中浓度组最明显。4.羟脯氨酸(HydroxyProhne,HYP)含量测定:在烫伤第7天、14天和21天实验各组组织中HYP含量均高于对照组,其中以中浓度组(120mg/L)最明显,其差异有统计学意义,P<0.05。5.CD34阳性血管密度值:实验各组CD34阳性血管密度值在烫伤后迅速升高,烫伤后7天达到高峰,以后逐渐下降,其中以中浓度组变化较为显著,对照组在烫伤后7天稍有上升,其余各个时间段变化不明显,中浓度组在烫伤第7天及14天均高于其他各组,且与低浓度组、高浓度组及生理盐水组对比,差异均具有统计学意义,P<0.05。第二部分胸腺素β4对大鼠深Ⅱ度烫伤创面中bFGF和VEGF表达的影响1.创面愈合率:烫伤第7天实验组与对照组创面愈合率差异不大,无统计学意义,烫伤第14天和第21天实验组高于对照组,其差异有显著性,P<0.05。2.愈合时间:实验组愈合时间为22.46±0.89天,对照组为24.54±1.10天,两组愈合时间差异有显著性,P<0.05。3. bFGF光密度值:在烫伤第7天和第14天实验组bFGF光密度值高于对照组,P<0.05,有统计学意义。烫伤第3天及第21天与对照组差异不大。4. VEGF光密度值:烫伤第3天,两组光密度值均有升高,两组差异无统计学意义。烫伤第7天和第14天实验组光密度度值高于对照组,P<0.05,有统计学意义,P<0.05。烫伤21天,实验组VEGF光密度值下降,与对照组差异不明显。结论胸腺素β4可明显促进大鼠深Ⅱ度烫伤创面愈合,其机制可能是通过促进VEGF和bFGF的表达及影响细胞凋亡有关。
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