【摘 要】
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羊呼吸系统疾病是一种临床上常见的疾病,主要临床症状包括精神沉郁、食欲不振、体温升高、咳嗽、呼吸困难以及呼吸道分泌物增加等。研究发现,绵羊肺炎支原体（Mycoplasma ovipneummoniae,Mo）、多杀性巴氏杆菌（Pasteurella multocida,Pm）、溶血性曼氏杆菌（Mannheimia hyopneuMoniae,Mh）、肺炎克雷伯菌（Klebsiella pneumon
【基金项目】
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宁夏回族自治区重点研发项目（2021BEF02026）“规模羊场地方高发疫病快速诊断技术研究与示范”子课题“滩羊呼吸系统疫病早期感染鉴别诊断技术研究”
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羊呼吸系统疾病是一种临床上常见的疾病,主要临床症状包括精神沉郁、食欲不振、体温升高、咳嗽、呼吸困难以及呼吸道分泌物增加等。研究发现,绵羊肺炎支原体（Mycoplasma ovipneummoniae,Mo）、多杀性巴氏杆菌（Pasteurella multocida,Pm）、溶血性曼氏杆菌（Mannheimia hyopneuMoniae,Mh）、肺炎克雷伯菌（Klebsiella pneumonia,K.pn）、肺炎链球菌（Strepococcus pneumoniae,S.pn）等是引起羊肺炎的主要病原菌,尤其是肺炎支原体在临床中具有较高的流行性。养羊业是宁夏地区畜牧业的重要组成部分,多年来对本地区羊呼吸道疾病的流行现状、病原多样性,以及羊肺炎支原体诱发的主要病理变化、主要侵染的靶器官及其免疫学变化鲜有报道。因此本研究就以上述问题为课题开展相关研究,试验结果如下:1.为了掌握宁夏不同地区羊呼吸系统疾病的发病状况及病原多样性,通过现场调查统计主要羊养殖县/区羊呼吸系统疾病的发病情况,采用分子生物学方法对采集的鼻拭子、肺脏、气管、心包液等样品进行病原检测鉴定。结果显示,在调查的1180只羊中有236只发病,发病率为20.26%。呼吸道疾病发病主要发生在2-7月龄的羊中。单一病原感染中Mo感染率最高,为69.52%;2种病原混合感染中,Mo与Pm混合感染率最高,为10.48%;3种病原混合感染中,Mo与Pm与Mh感染率最高,为3.81%。结果显示,调查的宁夏地区七个主要羊养殖县/区均有Mo感染情况,并有Pm、Mh、K.pn、S.pn多重病原混合感染。2.采集不同地区13个规模化养殖场的105份病料样本进行病原分离和鉴定,选择由Mo单一感染的不同内脏器官,进行病理剖检和病理组织学变化分析。结果显示,从调查的13个养殖场采集的病料样品中分离出13株Mo;支原体引起的病变部位主要表现在肺脏和气管,其双侧肺上叶出现严重的实质性肉变,肺脏与胸腔产生黏连,肺脏部分区域出现淤血,气管、支气管含大量泡沫样黏液。肺脏、支气管的病理组织学变化为上皮细胞坏死、脱落、增生,支气管管腔内和肺泡腔内有大量炎性细胞浸润,支气管和气管黏膜固有层水肿、炎性细胞浸润。3.为了探究Mo入侵机体后主要定植的靶器官,采用免疫组织化学技术开展不同内脏器官Mo病原定位研究。结果显示,肺脏组织的Mo阳性面积占比最大,为5.22%,支气管的Mo 阳性面积次之,为4.91%,气管的Mo 阳性面积占比为1.42%,三者与心脏、肝脏、肾脏、脾脏Mo阳性百分比相比差异极显著（P＜0.01）。各内脏组织的病理切片中均存在Mo,但主要存在的器官或组织为肺脏、支气管和气管。4.为了探究Mo诱导靶器官产生的免疫反应,本试验采用RT-PCR技术对靶器官中细胞因子（IL-1β、IL-2、IL-4、IL-6、IL-10、IL-12、TNF-α、IFN-γ、NF-κB）的转录水平进行测定。结果显示,气管组织中mRNA表达量上调的因子包括IL-1β、IL-6、IL-10、IL-12和NF-κB;在支气管中表达量上调的因子包括IL-1β、IL-2、IL-10、IL-12、TNF-α、IFN-γ和NF-κB;在肺尖叶中表达量上调的因子包括IL-1β、TNF-α、IFN-γ和NF-κB;在肺心叶中表达量上调的因子包括IL-1β、IL-6、TNF-α IFN-γ和NF-κB;在肺膈叶中表达量上调的因子包括IL-1β和NF-κB;研究发现,IL-1β和NF-κB的表达量与内脏器官病变程度呈正相关。综上所述,宁夏地区羊呼吸道疾病以Mo感染为主,病原呈现多样化;本研究分离鉴定了 13株Mo宁夏分离株;病理组织学和免疫组织化学分析显示,Mo主要侵染的靶器官为肺脏、支气管和气管;靶器官中细胞因子的表达产生了不同程度的上调或下调,和病理变化存在一定相关性。研究结果为宁夏地区羊支原体性肺炎流行规律、致病机理和防控的研究提供了参考。
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