黑穗醋栗叶斑病病原鉴定及防治药剂筛选

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叶斑病是近年黑穗醋栗生产栽培中发生较严重的一种病害,主要侵染植物的叶片,初期在叶片上形成浅褐色水渍状斑点,稍后斑点变褐,后期病斑浅灰色或灰白色,斑点中心形成黑色孢子器,叶片变黄卷曲,提前脱落,从而引起黑穗醋栗产量及果实质量的下降。国内对黑穗醋栗叶斑病的发病症状仅有过记载,还没有相关的系统研究。本文对引起叶斑病病原菌的种类及其生物学特性进行了研究,并进行了防治药剂的筛选,从而为黑穗醋栗的抗叶斑病育种及病害的防治提供理论依据。本研究于2006年7月~2006年8月从黑龙江省海林市、桦川县、宾县和东北农业大学园艺试验站4个栽植地采集典型病样,采用组织分离法对叶片病斑进行分离及纯化。从培养基、温度、光照、pH值、湿度几个方面对病原菌的生物学特性进行研究,采用生长速率法和平板对峙培养法对防治药剂进行筛选。于显微镜下观察菌丝体结构和分生孢子形态发现:菌丝体呈树杈状伸展,白色,有隔膜;分生孢子器球形或近球形,器壁暗褐色,膜质;分生孢子线形,无色透明,正直或弯曲,顶端略尖,1~3个隔膜。按照柯赫氏法则回接到4~5片叶子的幼苗上,3个月后表现田间病害的初期症状。根据《真菌的形态和分类》和《中国真菌志》,确定分离的病原菌为壳针孢属(Septoria),属于半知菌亚门(Deuteromycetes)球壳孢目(Sphaeropsidales)球壳孢科(Sphaeropsidales)。病原菌在马铃薯葡萄糖琼胶培养基(PDA)上生长最好,6d长满培养皿(菌落直径90.0mm),且产孢均匀,培养12d产孢量为8.55×10~6个/mL,其次为燕麦片培养基和玉米粉琼胶培养基,病原菌在黑穗醋栗汁液培养基上生长最差,6d菌落直径仅为55.0mm,并且不产生孢子。适宜病原菌生长的温度范围为20~30℃,25℃为最适温度,此温度下的菌落直径和产孢量分别达到最大值;15℃病原菌生长不好,6d菌落直径仅为23.7mm,并且不产生孢子;30℃以上病原菌停止生长。适合分生孢子萌发的温度范围为20~30℃,25℃萌发最好,培养10h镜检萌发率达94%;温度为15℃或者高于40℃,培养24h镜检孢子萌发率仅为40%和5%。病原菌在全黑暗、全光照、12h光照-12h黑暗交替3种条件下生长速度没有很大差别,6d菌落直径均达到90.0mm;持续的光照不利于病原菌产孢,在全光照、12h光照-12h黑暗交替的2种条件下,培养12d的产孢量为4.20×10~6个/mL和2.87×10~6个/mL,而全黑暗的条件下为8.55×10~6个/mL。在培养初期光照似乎可以促进病原菌分生孢子的萌发,全黑暗、全光照、12h光照-12h黑暗交替的3种条件下培养2h孢子萌发率分别为0、10%和10%;而后期发现光照对分生孢子萌发影响不大,24h镜检孢子萌发率均达到95%以上。病原菌在pH值6.0~9.0的范围内生长速度没有差异性,6d菌落直径均达到90.0mm;最适pH值为7.0,此pH值的菌落直径和产孢量分别达到最大值。适合病原菌分生孢子萌发的pH值范围为5.0~7.0,pH值6.0时孢子萌发最好,培养24h镜检孢子萌发率达98%。病原菌的分生孢子在高湿度条件下萌发好,培养24h镜检孢子在90%湿度和水中的萌发率分别达到93%和97%,而在75%和60%的湿度下萌发率仅为76%和39%。对壳针孢菌防治效果较好的化学药剂为:福星(Flusilazole,7000~10000倍液)、三唑酮(Triadimefon,800~900倍液)、达科宁(Daotech,400~700倍液)和腈菌唑(Myclobutanil,1500~3000倍液),其中福星的抑菌效果最佳,抑菌率为75.4%~79.3%;防治效果较好的生物药剂有放线菌菌株2-17和世绿(validamycin A,1000~1600倍液),抑菌率分别为61.9%和37.8~44.8%。最佳混配组合及其配比比例为三唑酮+达科宁(2∶1)和福星+腈菌唑(3∶1),抑菌率分别达到86.4%和82.8%。
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