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目的:建立体外新生大鼠缺氧缺血性脑损伤(Hypoxic-ischemic brain damage,HIBD)模型,观察大鼠HIBD后松果体内微RNA-375-3p(microRNA-375-3p,mi R-375-3p)、地塞米松诱导的Ras相关蛋白1(dexamethasone-induced Ras-related protein 1,Rasd1)、隐花色素1(Cryptochrome1,Cry1)的表达变化,通过荧光素酶报告基因实验证实Rasd1是miR-375-3p的靶基因,初步探讨miR-375-3p调控Rasd1在HIBD后昼夜节律紊乱中的作用。方法:采用7日龄的SD(Sprague-Dawley)大鼠,按随机原则,分假手术组(Sham组)和缺氧缺血组(HIBD组),根据Rice-Vannucci改良法,制作体外大鼠HIBD模型。利用实时荧光定量PCR(Real-time quantitative PCR,RT-qPCR)法测定两组在HIBD后0 h、8 h、16 h、24 h、32 h、40 h、48 h七个时间点松果体内miR-375-3p、Rasd1、Cry1的表达变化;利用荧光素酶报告基因实验验证miR-375-3p的靶基因是Rasd1。结果:1、在HIBD模型建立后,HIBD组miR-375-3p的表达水平在8 h高于相应观察点的Sham组(P<0.05),在24 h、32 h、40 h、48 h低于相应观察点的Sham组(P<0.05),而HIBD组miR-375-3p的表达水平在0 h、16 h与相应观察点Sham组比较,差异无统计学意义(P>0.05);在HIBD后miR-375-3p的表达在16 h达到高峰,24 h起降低,持续至48 h。2、在HIBD模型建立后,HIBD组Rasd1的表达水平在8 h、16 h、48 h低于相应观察点的Sham组(P<0.05),在0 h、24 h、32 h、40 h高于相应观察点的Sham组(P<0.05);在HIBD后Rasd1 mRNA的表达在24 h明显上升,32 h起降低,48h达最低。3、HIBD后早期,在松果体内8 h和16 h miR-375-3p表达上调,Rasd1基因表达下调;24小时起miR-375-3p表达明显下调,Rasd1基因表达上调。4、在HIBD模型建立后,HIBD组Cry1的表达水平在16 h、24 h高于相应观察点的Sham组(P<0.05),在32 h、40 h低于相应观察点的Sham组(P<0.05),而HIBD组Cry1的表达水平在0 h、8 h、48 h与相应观察点Sham组比较,差异无统计学意义(P>0.05);在HIBD后Cryl mRNA的表达在16 h开始上升,24 h达到顶峰,32 h起降低,持续至48 h。5、HIBD后,Cry1与Rasd1在松果体中的mRNA水平均呈现先升高后降低的趋势,在24 h达到高峰,32 h开始降低。6、荧光素酶报告基因实验验证Rasd1是miR-375-3p的靶基因。结论:1、HIBD后早期,在松果体内mi R-375-3p表达上调,Rasd1基因表达下调;中晚期miR-375-3p表达明显下调,Rasd1基因表达上调。2、HIBD后,Cry1与Rasd1在松果体中mRNA水平均呈现先升高后降低的趋势,提示Rasd1可能参与HIBD后昼夜节律紊乱的病理生理过程。3、Rasd1是miR-375-3p的靶基因之一。