从TGF-β/Smad、ERK/GSK3β信号通路调节EMT过程研究加味麻杏石甘汤对放射性肺损伤的干预机制

来源 :浙江中医药大学 | 被引量 : 0次 | 上传用户:winskinglee
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目的:(1)明确加味麻杏石甘汤通过调控肺泡上皮细胞的EMT过程减轻放射性肺损伤的发生。(2)探寻加味麻杏石甘汤调控EMT过程的主要信号调控通路。方法:(1)清洁级SD大鼠分为模型组和对照组,模型组给予高加味麻杏石甘汤复方制剂(19.5g/d)灌胃3天制备含药血清,正常组给予生理盐水灌胃制备大鼠血清。(2)对大鼠肺泡Ⅱ型上皮细胞进行射线照射,总剂量5Gy,3.64cGy/min,含药血清干预。(3)采用 RT-PCR检测 Vimentin、α-SMA、E-cadherin、TGF-β、Smad2、Smad3、ERK、Snail 等 RNA 表达水平,Western-Blot 检测 Vimentin、α-SMA、E-cadherin、Smad2、Smad3、ERK、GSK3 β 等蛋白表达水平,ELISA法检测TGF-β蛋白,激光共聚焦方法检测snail的转核水平。结果:(1)干预48h后,模型组与对照组比较,大鼠肺泡Ⅱ型细胞Vimentin mRNA、α-SMA mRNA、TGF-β mRNA及 Smad2mRNA、Smad3 mRNA、ERK mRNA 及 Snail mRNA 表达均上调(P<0.05),E-cadherine mRNA 表达下调(P<0.05);Vimentin、α-SMA、TGF-β(P<0.05)、Smad2、Smad3、ERK、GSK3 β蛋白表达均上调,E-cadherin蛋白表达下调。Snail转核水平出现上调。(2)干预48h后,高、中、低剂量组分别与模型组比较,大鼠肺泡Ⅱ型细胞Vimentin mRNA、α-SMA mRNA、TGF-β mRNA 及 Smad2 mRNA、Smad3 mRNA、ERK mRNA 及 Snail mRNA 表达均下调(P<0.05),E-cadherine mRNA表达上调(P<0.05);Vimentin、α-SMA、TGF-β(P<0.05)、Smad2、Smad3、ERK、GSK3 β蛋白表达均下调,E-cadherin蛋白表达上调。snail转核水平出现下调。(3)干预48h后,各含药血清组Vimentin mRNA、α-SMA mRNA、TGF-β mRNA、Smad2 mRNA、Smad3 mRNA、ERK mRNA 及 Snail mRNA表达随含药血清浓度上升而下降(P<0.05),E-cadherinemRNA表达随含药血清浓度上升而上升(P<0.05);各含药血清组Vimentin、α-SMA、TGF-β(P<0.05)、Smad2、Smad3、ERK、ERK、GSK3 β等蛋白的表达随含药血清浓度上升而下降,E-cadherin蛋白表达随含药血清浓度上升而上升。Snail转核水平随含药血清浓度上升而下降。结论:(1)加味麻杏石甘汤可通过调控EMT过程干预放射性肺损伤的发生。(2)加味麻杏石甘汤可通过调节TGF-β/Smad、ERK/GSK3 β信号通路调控EMT过程。
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