论文部分内容阅读
背景和目的有机荧光染料香豆素是作为荧光探针和电致发光材料的重要荧光染料化合物。表皮生长因子受体(epidermal growth factor receptor, EGFR)是受体酪氨酸激酶家族中的重要成员之一,埃罗替尼(Erlotinib)是小分子酪氨酸激酶抑制剂,属于4-氨基喹唑啉类口服型抗肿瘤药物。主要用于非小细胞肺癌等的治疗,埃罗替尼与表皮生长因子受体(epidermal growth factor receptor, EGFR)的酪氨酸激酶(tyrosine kinase, TK)结合具有高度特异性和可逆性的特点,肺癌等恶性肿瘤细胞常伴有EGFR高表达。循环肿瘤细胞的检测是影响患者预后的重要因素,探讨有效的检测循环肿瘤细胞的方法有重要意义。目前,尚未见以埃罗替尼为靶向基团制备荧光探针用于识别EGFR高表达的肺癌细胞等恶性肿瘤细胞的荧光探针的相关文献报道。方法1.制备香豆酸叠氮化合物和去质子埃罗替尼。2.制备以埃罗替尼为靶向基团的荧光探针。3.培养EGFR高表达肺癌A-549细胞作为实验组,培养宫颈癌CaSki、SiHa和C33-A细胞作为对照组。4.通过倒置荧光显微镜观察以埃罗替尼为靶向基团的荧光探针对EGFR高表达肺癌A-549细胞的识别能力。结果1.制备香豆酸叠氮化合物：通过水杨醛与丙二酸二乙酯的活性亚甲基进行缩合闭环反应得到香豆素环,通过柯诺瓦诺格反应制备出香豆酸,并经标准对照品确证,产物较纯无杂质点,可用于后续实验。将EDC与香豆酸的羧基加成得到活性中间体后,引入催化剂NHS,将此活性中间体变为相对稳定的活性酯中间体,再经3-氨丙基叠氮的氨基进攻该活性酯中间体,形成酰胺键连接的目标产物。2.以埃罗替尼为靶向基团的荧光探针的制备：香豆酸叠氮化合物和乙炔基埃罗替尼发生点击反应,得到探针分子。质谱图显示的质荷比为737.34166峰为其分子离子峰,核磁共振氢谱图确证成功制备了以埃罗替尼为靶向基团的荧光探针。3.以埃罗替尼为靶向基团的荧光探针对EGFR高表达的肺癌A-549细胞的识别能力：用10 μM的以埃罗替尼为靶向基团的荧光探针对肺癌A-549细胞(实验组)和CaSki细胞(对照组)进行荧光识别,A-549细胞和CaSki细胞中均观察到强的荧光信号。用较低浓度的11μM的以埃罗替尼为靶向基团的荧光探针对肺癌A-549细胞(实验组)和CaSki、C33A、SiHa细胞(对照组)进行荧光识别,A-549细胞中仍可观察到强的荧光信号,C33A中可观察到较弱的荧光信号,而CaSki和SiHa细胞中几乎不能观察到荧光信号。用更低浓度的0.1μM的以埃罗替尼为靶向基团的荧光探针对肺癌A-549细胞(实验组)和CaSki、C33A、SiHa细胞(对照组)进行荧光识别,A-549细胞中仍可观察到强的荧光信号,而CaSki、C33A和SiHa细胞中几乎不能观察到荧光信号。结论1.成功制备了以埃罗替尼为靶向基团的荧光探针。2.初步证明了以埃罗替尼为靶向基团的荧光探针可特异性识别A-549细胞。