【摘 要】
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目的:肺癌居全世界恶性肿瘤死因首位,肺腺癌（LUAD）占肺癌的40%以上,是治疗中最具挑战性的癌症。锚蛋白重复结构域49蛋白（ANKRD49）在肺腺癌中高表达,但其功能未知。为了解ANKRD49在肺腺癌中的作用,本研究采用ANKRD49基因过表达、敲低技术构建A459稳定细胞系,在细胞水平和裸鼠体内水平研究ANKRD49的功能及其机制。方法:ANKRD49 overexpression和knock
【基金项目】
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山西省自然科学基金（编号:201901D111352）
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目的:肺癌居全世界恶性肿瘤死因首位,肺腺癌（LUAD）占肺癌的40%以上,是治疗中最具挑战性的癌症。锚蛋白重复结构域49蛋白（ANKRD49）在肺腺癌中高表达,但其功能未知。为了解ANKRD49在肺腺癌中的作用,本研究采用ANKRD49基因过表达、敲低技术构建A459稳定细胞系,在细胞水平和裸鼠体内水平研究ANKRD49的功能及其机制。方法:ANKRD49 overexpression和knockdown慢病毒感染肺腺癌细胞A549,筛选构建A549稳定细胞系（ANKRD49 OE）、（ANKRD49 KD）及对照细胞系,并经RT-q PCR和Western blot进行验证;分别采用CCK-8和克隆形成实验检测ANKRD49对A549细胞增殖的影响;采用划痕实验和transwell侵袭迁移实验检测ANKRD49对A549细胞侵袭和迁移的影响;ANKRD49 OE或vector-A549尾静脉注入裸鼠,观察裸鼠肺部肿瘤结节数量及分布。基质金属蛋白酶MMP（matrix metalloproteases,MMPs）-2/MMP-9的表达和活性分别采用RT-q PCR、Western blot和明胶酶谱进行检测;通过Western blot和/或免疫组化分析验证MAPK（mitogen-activated protein kinase丝裂原活化蛋白激酶）通路蛋白、转录因子ATF-2分子的表达及其在胞浆胞核的分布;转录因子ATF-2敲低后对MMP-2/MMP-9的影响采用Western blot检测。结果:成功构建过表达和敲低ANKRD49的A549细胞系;CCK-8、克隆形成实验表明ANKRD49不影响A549细胞的增殖;划痕实验和transwell实验结果显示ANKRD49可以促进A549细胞的侵袭和迁移;裸鼠实验表明,ANKRD49促进A549细胞体内肺部转移和侵袭;RT-q PCR、Western blot、免疫组化及明胶酶谱结果显示,ANKRD49促进A549细胞中MMP-2/9的表达并促进MMP-2/9的酶活性,使用MMPs抑制剂后,过表达ANKRD49的A549细胞迁移能力减弱;Western blot和免疫组化实验结果显示,过表达ANKRD49后,细胞和组织的p-P38水平升高,ATF-2的磷酸化水平升高且在细胞核的分布增加;敲低转录因子ATF-2后,明显抑制ANKRD49过表达促进的MMP-2/MMP-9表达。结论:ANKRD49通过P38/ATF-2信号通路依赖的方式上调基质金属蛋白酶的表达和活性,促进了肺腺癌细胞A549在体内外的侵袭和迁移。
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