【摘 要】
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仔猪腹泻是困扰养猪业的主要疾病。多种腹泻因素造成肠道黏膜损伤后的黏膜修复对发病仔猪的转归至关重要。肠黏膜修复相关因子，如转化生长因子(TGF)、表皮生长因子(EGF)的基因
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仔猪腹泻是困扰养猪业的主要疾病。多种腹泻因素造成肠道黏膜损伤后的黏膜修复对发病仔猪的转归至关重要。肠黏膜修复相关因子，如转化生长因子(TGF)、表皮生长因子(EGF)的基因表达决定受损肠黏膜的修复水平。为了探讨硫酸小檗碱对损伤肠粘膜上皮细胞修复的作用，开展了如下研究： 1.利用酶消化法培养仔猪肠黏膜上皮细胞(IEC)。通过对培养细胞的显微形态观察和CK-18角蛋白免疫组化鉴定，确定培养的细胞为仔猪肠黏膜上皮细胞。 2.利用MTT法筛选硫酸小檗碱对IEC的安全浓度，试验选择5μ mol/L、10μmol/L、20μ mol/L、40μ mol/L、80μ mol/L等浓度下对IEC的影响，结果表明硫酸小檗碱对体外培养的IEC最大安全浓度为20μ mol/L，高于此浓度则表现细胞毒性，导致细胞坏死脱落，无法开展药效学研究。 3.利用猪轮状病毒对仔猪IEC攻毒建立细胞损伤模型。本研究分别筛选不同剂量的轮状病毒感染细胞，结果表明本试验用的猪轮状病毒TCID50是10-4.5/0.1mL。用0.2mL(126 TCID50)猪轮状病毒对仔猪肠黏膜上皮细胞进行攻毒，既可以损伤细胞，又不至于把细胞大量杀死，符合试验要求。 4.在建立轮状病毒对IEC损伤模型基础上，分攻毒前和攻毒后两种时间点使用硫酸小檗碱进行干预。试验一组先用猪轮状病毒对IEC攻毒造成损伤，再用5μ mol/L、10μ mol/L、20μ mol/L三个浓度的硫酸小檗碱对受损的IEC用药。试验二组是先向IEC加入5μ mol/L、10μ mol/L、20μ mol/L三个浓度的硫酸小檗碱，作用一定时间后再对其攻毒造成损伤，同时设立第三组为对照组。对不同处理组的细胞提取总RNA，采用实时荧光定量PCR法测定硫酸小檗碱对仔猪IEC中TGF-β1基因表达的影响。 用SPSS软件对所得的结果分析发现，与对照组相比，两个试验组中5μ mol/L、10μ mol/L、20μ mol/L三个浓度的硫酸小檗碱均可以显著提高IEC中TGF-β1mRNA的表达量(p＜0.05);其中浓度为10μ mol/L时TGF-β1 mRNA的表达量升高极显著(p＜0.01);用药24 h后TGF-β1 mRNA表达量升高显著(p＜0.05)。 结果表明硫酸小檗碱能够提高损伤的肠黏膜上皮细胞修复因子TGF-β1基因表达，对受损肠黏膜的修复具有促进作用。
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