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“色”是食品色、香、味三要素中的感官要素,在食品中添加安全的色素可提高食欲和购买愿望,对食品行业的发展有促进意义;近年来,受利益的驱使,不安全和不合理的色素添加引起的安全问题受到社会和公众关注。阿朴酯添加到蛋、肉鸡饲料中可有效提升鸡蛋和肉鸡皮肤的色泽,促进产品的销售,提高养殖效益。目前阿朴酯的研究主要关注在生产性能的影响上,鲜见较详细的安全性研究,特别是对人体机能的影响。本试验选用小鼠作为考察对象,考察阿朴酯的安全性,以及对小鼠骨髓造血功能、体液免疫功能三方面的影响,以期为客观评价阿朴酯的安全风险提供参考。方法:(1)本论文根据GB/T 21603-2008急性毒性试验标准,测定阿朴酯对小鼠的LD50。(2)阿朴酯按1.4 g/kg·BW剂量一次性灌胃后,在第4 h、12 h、36 h、7 d和14 d,应用罗氏比色扇法,观察腹部皮下、腹水、腹膜、耳廓、尾巴、脚掌的色度变化。探究阿朴酯对小鼠的着色与褪色规律。(3)阿朴酯按1.4g/kg·BW剂量一次性灌胃小鼠后,在第0 h、4 h、12 h、36 h、60 h及第7 d、14d采血检测血常规各项指标,探索白细胞、淋巴细胞、红细胞等血常规指标变化趋势。连续以阿朴酯1.4、2.2 g/kg·BW灌胃小鼠21 d后,采集尿液和血清分别进行尿常规指标、生化指标测定,取肝、肾组织切片,HE染色,镜下观察组织学损伤。(4)阿朴酯按1.4、2.2 g/kg·BW剂量连续灌胃小鼠30 d,取小鼠股骨骨髓,血球计数板计数骨髓有核细胞,瑞氏-姬姆萨染色骨髓细胞,测定骨髓中红系、粒系、淋巴系细胞数目,计算骨髓各系造血细胞比例变化;采用酶联免疫吸附法检测血清中粒细胞集落刺激因子和促红细胞生成素含量的变化。以评价阿朴酯对骨髓造血功能影响。(5)阿朴酯按1.4、2.2 g/kg·BW剂量连续灌胃小鼠21 d。观察阿朴酯对脾脏、胸腺脏器系数的影响;采集血清,应用酶联免疫吸附法测定血清免疫球蛋白Ig M、Ig G、SIg A和免疫细胞因子IL-1b、TNF-α、IL-10、IFN-γ的含量;应用实时荧光定量PCR测定在阿朴酯作用下正向免疫调节基因IL-1b和负向免疫调节CTLA-4、PD-1m RNA相对表达水平的变化。考察阿朴酯对体液免疫机能的影响。结果:(1)阿朴酯对小鼠的LD50为2.74 g/kg·BW,依据WHO毒性标准,范围501~5000 mg/kg·BW为低毒级物质。(2)按1.4 g/kg·BW剂量一次性灌胃阿朴酯后,小鼠腹下皮肤、腹水、腹膜、耳廓等部位黄度值升高,升高速度:皮下>耳廓皮肤>尾和脚掌,消除速度则相反。各部位在第4 h色度达到最高值,其中尾和脚掌在第4~12 h内、腹部皮下和耳廓皮肤在第4~36 h内、腹水与腹膜在第4 h~7 d内色度呈极显著升高(P<0.01),各部位色度在4 h后逐渐消退,尾和脚掌在第7 d后、其他部位在14 d后色度与对照组差异消失(P>0.05)。说明大剂量一次性灌服阿朴酯后,可使小鼠体内外组织快速着色,但色度消除也快。(3)阿朴酯按1.4 g/kg·BW单次灌胃后的第4~36 h内,小鼠白细胞数、淋巴细胞数、中性粒细胞数、红细胞数、平均红细胞血红蛋白含量显著上升(P<0.05),较对照组。其中白细胞、淋巴细胞与中性粒细胞、红细胞与平均红细胞血红蛋白分别在第12 h、4 h、36 h数目与含量达到峰值。随后逐渐下降,至第60 h后差异均不显著(P>0.05)。以1.4、2.2 g/kg·BW剂量连续灌胃阿朴酯后第21 d,小鼠增重和平均日增重下降极显著(P<0.01),尿液中白细胞、蛋白质、微白蛋白、酮体含量显著上升(P<0.05);血中碱性磷酸酶、尿素含量极显著提高(P<0.01),尿酸、谷草转氨酶、肌酐显著下降(P<0.05);肝脏淤血黄染,肝的病理切片显示肝窦肝索结构紊乱,肝细胞肿胀,坏死;肾黄染肿大,病理切片显示肾小体结构破损,血管球碎裂消失,髓质弥漫性出血。(4)阿朴酯分别按1.4、2.2 g/kg·BW连续灌胃小鼠30 d,均可显著提升小鼠骨髓有核细胞的数目与淋巴系细胞比例(P<0.05);且2.2 g/kg·BW剂量组粒系细胞占比出现显著上升(P<0.05)。2个剂量组,可显著增加血清粒细胞集落刺激因子含量(P<0.05),而促红细胞生成素的含量变化不显著(P>0.05)。(5)阿朴酯分别按1.4、2.2 g/kg·BW灌胃小鼠持续21 d。2个剂量均使小鼠CTLA-4、PD-1基因相对表达水平均显著增加(P<0.05);2.2 g/kg·BW剂量使小鼠IL-1b相对表达水平极显著增加(P<0.01);使脾脏脏器系数增高显著(P<0.05),血清中炎性因子TNF-α、IL-10含量显著上升,IL-1b升高极显著(P<0.01),而小鼠免疫球蛋白下降趋势,其中Ig M和SIg A含量显著下降(P<0.05)。结论:阿朴酯属低毒级物质,按国家规定标准添加对畜禽与人相对安全。但高剂量阿朴酯可使小鼠皮肤内脏快速着色,且颜色消退也快,能快速升高血细胞数量,对小鼠肝、肾组织结构造成破坏。阿朴酯可刺激骨髓有核细胞增生,其中淋巴系、粒系造血细胞增生显著,提升粒细胞集落刺激因子含量,对骨髓造血功能存在积极作用。阿朴酯对体液免疫功能有双向调节作用。损伤免疫器官与引起炎症反应过度,减弱机体正向免疫调节功能;提升负向调节因子表达,促进负向免疫调节机能。本研究结果为评估阿朴酯的安全性以及高剂量下对人体造血和免疫调节作用提供参考。