扬子毛茛活性部位提取工艺及药效学研究

来源 :贵阳医学院 | 被引量 : 0次 | 上传用户:zhouqidhi
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目的:1.探索扬子毛茛(YangZiMaoGen,YZMG)抗炎活性部位的最佳提取工艺。2.观察YZMG最佳提取工艺所得提取物对疼痛和炎症模型的镇痛和抗炎作用。  方法:1.采用正交设计,以乙醇浓度、溶剂体积、提取时间为考察因素,以尿囊素的含量为评价指标优选最佳提取工艺。采用二甲苯致小鼠耳肿胀实验来验证不同提取物对小鼠的抗炎作用与尿囊素含量的相关性。分别采用苏木精-伊红(HE)染色法在电镜下观察炎症细胞的浸润程度、紫外分光光度法、酶联免疫吸附法(ELISA)探索YZMG不同提取物对炎症小鼠血液中前列腺素E2(PGE2)、白介素-6(IL-6)、肿瘤坏死因子-α(TNF-α)的含量的影响以验证最佳提取工艺。2.应用非特异性炎症模型腹腔毛细管通透性实验以及经典的疼痛模型热板法和醋酸所致扭体实验来观察YZMG的抗炎镇痛活性。  结果:1.通过正交实验优选的最佳提取工艺为90%的乙醇以12倍(V/m)体积回流提取1.5 h。通过药效学验证发现,正交实验所得最佳提取工艺组能降低小鼠耳肿胀度,与模型组比较,差异非常显著,其对耳肿胀的抑制率最大。含量较低的Ⅲ号、Ⅵ号、Ⅶ号、Ⅷ号提取方案组可降低小鼠耳肿胀度,与模型组比较,差异显著,抑制率比最佳提取工艺组低。而含量最低的Ⅰ号、Ⅳ号、Ⅴ号、Ⅸ号提取方案组与模型动物空白对照组比较,差异无显著性。根据正交试验结果,对尿囊素的含量与耳肿胀抑制率做相关性分析,相关系数为0.816,P<0.001,差别有统计学意义,尿囊素含量与耳肿胀抑制率之间存在直线相关关系。通过在镜下观察药物对模型动物耳片病变的影响,发现YZMG最佳提取工艺组对小鼠耳片组织的炎性细胞浸润程度的抑制作用最强,此组动物炎症组织中炎症细胞的数量最少。Ⅲ号、Ⅵ号、Ⅶ号、Ⅷ号提取方案组,对小鼠耳片组织的炎性细胞浸润程度的抑制作用比最佳提取工艺组小。通过各组对炎症细胞因子PGE2、IL-6、TNF-α的影响发现,最佳提取工艺组对3种细胞因子生成的抑制作用最强。2.最佳提取工艺所得提取物的高(10 g·kg-1)、中(5 g·kg-1)、低(2.5g·kg-1)剂量组均可明显拮抗由热刺激和醋酸诱导(量效关系明显)的疼痛反应。高、中剂量组对冰醋酸所致小鼠腹腔毛细血管通透性有抑制作用,与模型组比较,差异具有显著性。低剂量组与模型组比较,差异无显著性。  结论:通过对各种提取物抗炎活性的验证,得出此最佳提取工艺方案可行,抗炎活性较强;最佳提取工艺所得提取物具有较强的抗炎镇痛活性,其抗炎作用机制可能与减少PGE2、 IL-6及TNF-α的生成有关,且尿囊素为YZMG抗炎镇痛作用的一个活性成分。
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