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目的:探讨过表达hnRNPAB亚型(A2/B1)对人结直肠癌“干性”及部分恶性生物学行为的影响,并探讨其分子机制。方法:利用过表达hnRNPAB亚型(A2/B1)基因的慢病毒载体hnRNPA2/B1-GFP-LV以及阴性对照病毒NC-GFP-LV转染人结直肠癌细胞株SW480和HT29细胞,从而建立实验组(既SW480/hnRNPA2/B1、HT29/hnRNPA2/B1)与对照组(SW480-NC、HT29-NC)。将各组细胞进行作以下4个方面的检测:(1)验证两组细胞中hnRNPA2/B1过表达效果:(1)通过RT-qPCR技术检测hnRNPA2/B1 mRNA相对表达量;(2)Western blot技术检测hnRNPAB亚型(A2/B1)蛋白的表达;(2)肿瘤干细胞特性检测:(1)平板克隆形成实验检测肿瘤克隆形成能力。(2)裸鼠成瘤实验检测肿瘤体内成瘤能力。(3)流式技术检测肿瘤干细胞标志物CD133、CD44。(3)其他恶性生物学行为的检测:(1)Transwell实验检测肿瘤侵袭能力(2)划痕实验检测肿瘤迁移能力(3)CCK8法检测肿瘤增殖能力。(4)Western blot技术检测WNT/β-catenin信号通路关键指标WNT3A、WNT5A及β-cantenin的蛋白表达。结果:(1)hnRNPA2/B1过表达效果的测定:(1)通过RT-qPCR技术来检测hnRNPA2/B1 mRNA相对表达量,其结果为:SW480细胞实验组与对照组中hnRNPA2/B1 mRNA相对表达量分别为为(3.53±0.31)及(0.97±0.32),实验组较对照组增高约3.5倍(P<0.01);HT29细胞实验组与对照组中hnRNPA2/B1 mRNA相对表达值为(3.32±0.33)及(0.98±0.32),实验组较对照组增高约3.3倍(P<0.01)。(2)Western blot检测hnRNPA2/B1蛋白表达结果为:在SW480细胞实验组和对照组中hnRNPA2/B1的蛋白表达为(0.72±0.03)和(0.52±0.02),同时在HT29细胞实验组和对照组中hnRNPA2/B1的蛋白表达分别为(1.10±0.04)和(0.78±0.03),实验组细胞表达显著增高(P<0.01),提示细胞过表达效果满意,细胞建模成功。(2)肿瘤细胞干细胞特性检测:(1)肿瘤克隆形成能力检测:SW480实验组与对照组中克隆形成率分别为(18.8±0.42)%和(5.6±0.21)%,(P<0.01);HT29实验组与对照组中克隆形成率分别为(16.1±0.53)%及(5.7±0.31)%(P<0.01)。(2)肿瘤细胞体内成瘤能力检测:两组细胞实验组肿瘤生长均较对照组快,接种细胞后2周处死裸鼠,取出肿瘤并测量大小SW480细胞实验组与对照组中肿瘤的体积大小分别为(1.575±0.38)cm~3和(0.865±0.30)cm~3;HT29细胞实验组与对照组中,肿瘤的体积大小分别为(1.49±0.25)cm~3和(0.81±0.23)cm~3;与对照组相比,实验组均显著增高(P<0.01)。(3)肿瘤细胞干细胞标志物检测:通过流式直标抗体检测两组细胞CD133的阳性率SW480实验组与对照组分别为(63.2±4.5)%和(47.3±3.3)%,而CD44的阳性率分别为(67.1±4.6)%和(49.5±5.2)%;同时在HT29实验组与对照组中CD133的阳性率过表达分别为(81.4±4.5)%和(64.5±3.4)%及,而CD44的阳性率分别为(79.4±4.6)%和(61.7±6.1)%。过表达hnRNPA2/B1后,肿瘤干细胞标志物CD133及CD44表达均显著增高(P<0.01)。(3)其他恶性生物学行为检测:(1)肿瘤细胞侵袭能力检测:SW480细胞实验组和对照组中穿过Transwell小室细胞数目分别为(315±6.7)和(62±4.3),同时HT29细胞实验组和对照组中穿过Transwell小室细胞数目分别为(289±7.2)和(54±5.2),实验组均较其对照组显著增高(P<0.01)。(2)肿瘤细胞迁移能力检测:SW480细胞实验组与对照组愈合率分别为(19.6±0.9)%和(2.23±0.8)%,HT29细胞实验组与对照组愈合率分别为(40.3±0.7)%和(6.4±0.6)%,和两种细胞的对照组比较,过表达hnRNPA2/B1后肿瘤细胞的迁移能力明显提高(P<0.01)。(3)肿瘤细胞增殖能力检测:检测两组细胞24h、48h、72h三个时间点的增殖抑制率。其中SW480细胞实验组和对照组的OD值分别为:24h(0.47±0.017)和(0.33±0.024);48h(0.62±0.027)和(0.40±0.034);及72h(0.65±0.043)和(0.42±0.037);同时HT29细胞实验组和对照组的OD值分别为:24h(0.49±0.032)和(0.31±0.033);48h(0.65±0.34)和(0.43±0.29);及72h(0.67±0.042)和(0.47±0.035)。结果提示与对照组对比,实验组细胞在24h、48h、72h三个时间点的OD值显著增高(P<0.01)。提示过表达hnRNPA2/B1后细胞的增殖能力得到了增强。(4)Western blot检测SW480细胞实验组和对照组中WNT3A蛋白表达量分别为(0.87±0.04)及(0.27±0.03),WNT5A蛋白表达量分别为(0.92±0.05)及(0.37±0.04),β-cantenin蛋白表达量分别为(0.54±0.03)及(0.32±0.02),同时HT29细胞实验组和对照组中WNT3A蛋白表达量分别为(0.91±0.03)及(0.52±0.04),WNT5A蛋白表达量分别为(1.01±0.06)及(0.28±0.05),β-cantenin蛋白表达量分别为(0.64±0.04)及(0.39±0.03),与对照组相比,实验组中三种蛋白表达明显提高(P<0.01)。结论:过表达hnRNPA2/B1可促进结直肠癌SW480、HT29细胞干性的获得并增强其增殖、迁移及侵袭能力,其机制可能与激活WNT/β-catenin信号通路相关。