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背景与目的胰腺癌是致死率极高的恶性肿瘤。早期诊断、治疗对改善胰腺癌患者预后至关重要，其关键之一在于对胰腺癌前病变--胰腺上皮内瘤变(Pancreatic intraepithelialneoplasia, PanIN)恶性转化为胰腺癌机制的了解。我们己知KrasG12D突变启动PanIN，Tp53突变、p16及Smad4缺失均可单独促进PanIN恶性转化。然而BRCA2缺失是否能促进PanIN恶性转化为胰腺癌目前尚不清楚。基于此，在成功分离建立KrasG12D突变的PanIN细胞株基础上，本研究拟静默PanIN细胞中BRCA2表达，并对其生物学功能和遗传学分子机制进行初步探讨。方法1运用RNA干扰建立BRCA2静默的稳定细胞株(PanIN-BR)，运用MTT实验、克隆增殖实验，Matrigel迁移及侵袭实验，流式细胞计数，裸鼠体内成瘤实验检测BRCA2静默后PanIN细胞生物学改变。2运用表达谱芯片筛选、Real-time PCR及Western blot验证BRCA2静默后差异表达基因。在PanIN细胞中干扰Pitx2，在PanIN-BR中过表达Pitx2，运用克隆增殖及Matrigel侵袭实验检测其生物学功能。3运用免疫组化检测Pitx2蛋白在人胰腺癌组织及癌旁组织中的水平，运用克隆增殖及侵袭实验检测Pitx2在人胰腺癌细胞中生物学功能。4分别运用甲基化PCR及Real-time PCR检测Pitx2在人胰腺癌组织中甲基化水平及Pitx2表达水平，明确两者相关性。在Tp53突变的小鼠胰腺癌细胞中以及Smad4静默的PanIN-SR细胞中过表达Pitx2，运用克隆增殖及Matrigel侵袭实验检测其生物学功能。运用Real-time PCR、Western blot明确Pitx2的表达与Smad4表达的相关性。结果1BRCA2静默促进PanIN细胞生长、克隆增殖、迁移、侵袭及成瘤能力，但对细胞凋亡影响无显著性差异。2表达谱芯片筛选，Real-time PCR及Western blot验证发现BRCA2静默后Wisp1,Ccna2, Cxcr4, Twist1, Ccnb2, Pitx2, Wisp2, Cdkn2a与Cdkn2b等基因显著差异表达。其中，在PanIN细胞中干扰Pitx2，促进PanIN细胞克隆增殖及侵袭；在PanIN-BR细胞中过表达Pitx2，可部分逆转PanIN-BR细胞已获得的克隆增殖及侵袭能力。3Pitx2在正常胰腺、PanIN-I期以及PanIN-II期导管组织中呈阳性表达，在PanIN-III期导管组织中表达减少，在胰腺癌组织中Pitx2表达明显减少；Pitx2阳性表达患者生存期高于阴性表达患者。同时，Pitx2过表达抑制人胰腺癌细胞克隆形成及侵袭能力。4Pitx2甲基化水平在36例胰腺癌组织以及配对癌旁组织中非常低，Pitx2基因在胰腺癌组织中甲基化水平与其表达水平不具相关性。Pitx2过表达可逆转细胞由于Smad4静默或Tp53突变所获得的克隆形成及侵袭能力；且在人胰腺癌细胞中证实，Smad4基因可促进Pitx2基因的表达。结论BRCA2静默可单独促进PanIN细胞生物学功能恶性转化，Pitx2过表达除了可逆转细胞由于BRCA2静默所获得的恶性生物学行为，同样可逆转Smad4静默或Tp53突变所获得的恶性生物学行为。Pitx2在正常胰腺和癌前病变组织中表达高于其在胰腺癌组织中表达，Pitx2表达阴性提示患者预后不良。Pitx2在小鼠PanIN细胞及人胰腺癌细胞表现出抑制恶性转化的生物学功能。在人胰腺癌中，Pitx2表达水平与其甲基化水平无关，而与Smad4的表达相关。因此我们推测，Pitx2在胰腺癌发生发展过程中可能是抑癌基因，这也为今后指导胰腺癌诊疗、评估其预后提供了一个可靠的生物学指标。