目的:系统性红斑狼疮（Systemic Lupus Erythematosus,SLE）是一种复杂的易反复发作的慢性自身免疫性疾病,累及皮肤、关节、肾脏、精神神经系统、肺等多个脏器,给患者的家庭和社会造成沉重负担。目前SLE的病因尚不明确,为遗传、免疫、环境、内分泌因素等多因素异常及相互作用的结果,其中以多种免疫系统路径的活化为特征,机制非常复杂,目前主要治疗方法仍以糖皮质激素及免疫抑制剂为主,但是不良反应在治疗过程中亦较为常见。SLE临床表现多种多样,其中是否出现肾脏和神经系统受累与患者的预后密切相关。虽然经过积极治疗,仍有很大比例的狼疮肾炎（lupus nephritis,LN）患者进展为终末期肾病,成为SLE患者的主要死亡原因之一。神经精神狼疮（neuropsychiatric involvement in SLE,NPSLE）的临床表现呈现多样性,发病机制复杂,免疫、炎症或血栓性病理改变在NPSLE的发生发展中占有重要地位。随着研究的深入,对于SLE发病机制的认识也在不断进展,其中Toll样受体4（Toll like receptors 4,TLR4）作为经典的炎性通路上游位点,同时参与固有免疫和适应性免疫的激活,其介导的免疫异常在SLE的发生和进展中发挥了非常重要的作用。由此,对于TLR4介导的NF-κB信号通路的阻断可以作为SLE的治疗靶点之一。纳曲酮（Naltrexone,NTX）作为一种长效的非选择性阿片受体拮抗剂,最初被批准应用于治疗海洛因成瘾和酒精依赖。近年来,纳曲酮在免疫调节方面的作用也越来越受到重视。低剂量纳曲酮（Low-dose naltrexone,LDN）通过“阿片类物质反弹”现象上调OGF-OGFr轴的表达,从而抑制T细胞和B细胞的增殖和活性发挥抗炎作用,另一方面,LDN能够阻断TLR4介导的NF-κB通路,从而改善自身免疫性疾患的炎症反应,成为其作为多种自身免疫相关性疾病辅助治疗的理论基础。目前,对于LDN应用领域的研究越来越广泛,特别是自身免疫性疾病的治疗方面,包括克罗恩病、多发性硬化、纤维多肌痛等,国外对于纳曲酮的应用研究还涉及到炎性肌病、银屑病、干燥综合征等,但对于LDN应用于SLE方面的研究,目前还较为有限。因此,我们选取MRL/lpr小鼠作为研究对象,给予LDN腹腔注射治疗,旨在探寻LDN对于MRL/lpr小鼠的免疫调节作用,并初步探寻其作用机制,为其是否能够应用于SLE的治疗提供理论依据。研究方法:第一部分:选取小鼠肾小球内皮细胞（MRGEC）及脑微血管内皮细胞（BEND.3）作为研究对象,正常组不进行药物干预;对照组在细胞贴壁稳定后,给予TNF-α0.1μg/ml共培养24小时;LDN组在细胞贴壁稳定后,给予梯度浓度的NTX预处理24小时后,继续给予TNF-α0.1μg/ml共培养24小时。应用CCK8测定细胞活力以确定最佳药物浓度。给予最佳浓度的NTX重复上述实验后,通过RT-PCR观察炎性细胞因子、黏附分子等的m RNA表达,通过Western Blot观察TLR4介导的NF-κB信号通路位点的蛋白表达情况。第二部分:选取10周龄雌性MRL/lpr小鼠20只,随机分为2组,每组10只,随机选取一组为LDN组,剩余一组为对照组。LDN组小鼠给予纳曲酮10mg/kg/d腹腔注射;对照组小鼠,给予生理盐水0.2ml/d腹腔注射,各组均连续给药8周。通过悬尾实验和强迫游泳实验观察小鼠抑郁症状的改善情况,通过尿蛋白/尿肌酐值、肾脏病理及免疫组化观察小鼠肾脏损害改善情况,通过海马回病理及免疫组化推断小鼠精神神经系统认知功能的改善情况,通过脾脏病理观察小鼠脾脏的增生情况。第三部分:通过ELISA测定小鼠外周血免疫球蛋白及细胞因子;应用流式细胞术测定Th1细胞、Th2细胞、Th17细胞、Treg细胞及Tfh细胞所占比例的变化,评估对T淋巴细胞亚群比例失调的改善情况;通过RT-PCR观察靶器官炎性细胞因子、黏附分子及阿片受体的m RNA表达情况;通过Western Blot评估TLR4介导的NF-κB信号通路相关位点的蛋白表达情况。结果:1、给予10-2mol/L、10-3mol/L浓度NTX的细胞活性低于对照组细胞,给予10-4mol/L及以下浓度NTX的细胞活性高于对照组细胞,其中以10-4mol/L药物浓度的细胞活性与对照组差异最为明显,为最佳浓度。通过TNF-α的诱导和NTX的预处理,小鼠脑微血管内皮细胞和肾小球内皮细胞中,LDN组和对照组TNF-α、IL-6及BAFF m RNA水平均较正常组明显升高,小鼠脑微血管内皮细胞中caspase-1较正常组升高;两种细胞LDN组TNF-α、IL-6及BAFF的m RNA表达水平低于对照组,其中小鼠脑微血管内皮细胞中caspase-1 m RNA表达水平低于对照组,小鼠肾小球内皮细胞的caspase-1 m RNA表达水平两组间无统计学差异。小鼠脑微血管内皮细胞中,LDN组和对照组细胞P-选择素及VCAM-1的m RNA表达均明显高于正常组,LDN组表达水平低于对照组。与TNF-α共培养后,LDN组和对照组NF-кB通路中TLR4、NF-кB、Iккαβ及磷酸化的NF-кB的蛋白表达均较正常组升高,IкBα表达减低,提示NF-кB通路激活;LDN预处理后,LDN组细胞TLR4、NF-кB、Iккαβ及磷酸化的NF-кB的蛋白表达均较对照组减低,IкBα表达升高,提示NTX下调该通路的激活。2、LDN组小鼠在悬尾实验和强迫游泳实验中的不动时间均少于对照组,提示LDN组小鼠抑郁行为较对照组改善;两组小鼠尿蛋白/尿肌酐值在第1-5周均持续增长,第6周开始LDN组小鼠增长减缓,第7-8周LDN组小鼠尿蛋白/尿肌酐值低于对照组,结果具有统计学意义;LDN组小鼠脾脏指数低于对照组,病理提示脾脏生发中心数量及Ig G沉积少于对照组;病理及免疫组化提示LDN组小鼠肾脏中的系膜细胞、内皮细胞增生及炎性细胞浸润轻于对照组,海马回中LDN组小鼠尼氏小体数量多于对照组,较对照组排列更整齐,提示改善了海马回中神经元的损伤和缺失,LDN组小鼠肾脏和海马回的Ig G沉积轻于对照组。3、LDN组小鼠外周血Ig G1和Ig G2水平均低于对照组,Ig G3两组间不具有统计学意义;LDN组小鼠外周血的IL-10水平低于对照组;两组间外周血IL-17、TNF-α及BAFF结果均不具有统计学意义;流式细胞术提示LDN组Th1/Th2细胞比值较对照组升高,Th17细胞比例减低,Treg细胞比例升高,Tfh细胞比例减低;RT-PCR结果提示脾脏、肾脏及大脑的除KOR以外的阿片受体m RNA表达升高,LDN组的肾脏及脑组织的炎性细胞因子及黏附因子m RNA均低于对照组;WB结果提示在NF-κB信号通路相关位点中,LDN组TLR4、NF-кB、Iккαβ及磷酸化的NF-кB、Iккαβ、IкBα的蛋白表达均较对照组减低,IкBα表达升高。结论:1、NTX可能通过下调TLR4介导的NF-κB信号通路的激活,改善脑微血管内皮细胞和肾小球内皮细胞被TNF-α诱导的损伤。2、LDN改善小鼠神经精神损害中的抑郁行为及认知功能异常;LDN减轻MRL/lpr小鼠蛋白尿及肾脏的病理损伤,改善脾脏增生,减轻小鼠肾脏、海马回及脾脏的Ig G的沉积。3、LDN减少外周血中炎性细胞因子和Ig G的生成;改善脾脏中T细胞亚群比例的失调,上调阿片受体m RNA的转录,下调大脑及肾脏的炎性细胞因子及黏附因子m RNA转录以及TLR4-NF-κB信号通路相关位点的蛋白的表达。提示LDN可能通过上调阿片受体的表达以及下调TLR4介导的NF-κB信号通路的激活对MRL/lpr小鼠发挥治疗作用。