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目的：苯妥英钠(Phenytoinsodium,PHT)在临床用于治疗癫痫、心律失常、三叉神经痛等疾病，其中以抗癫痫应用最为常见。但其用药剂量和中毒剂量非常接近，且体内药代动力学模型呈非线性动力学性质，易出现多个系统的毒副作用。神经系统的不良反应主要为小脑萎缩、小脑功能失调症、智能障碍、颅内压增高等。奥拉西坦(Oiracetam,ORC)是目前临床广泛应用的促智药物之一，可影响胆碱能、谷氨酸能等多个神经递质系统及提高大脑对氧的利用能力，促进大脑联络纤维突触的可塑性，调动未受损脑组织重组及功能重建，具有激活、保护和修复脑细胞的作用。在临床上用于治疗各种理化因素引起的脑损伤，脑缺氧和慢性脑功能不全等。本实验通过免疫组织化学法检测凋亡相关蛋白Bcl-2、Bax的表达水平和原位脱氧核糖核苷酸末端标记法(TUNEL)，观察苯妥英钠和奥拉西坦对小鼠海马、小脑神经细胞凋亡的影响，探讨苯妥英钠引起神经系统不良反应机制，奥拉西坦对苯妥英钠作用后神经细胞是否有保护作用及其剂量与效果之间的关系。方法:1实验动物及分组：4周龄健康雄性昆明小鼠40只，体重22±2g，随机平均分为NS组（8只）；PTH组（8只）；PTH与低、中、高剂量ORC联合组：PTH+ORC1组（8只）、PTH+ORC2组（8只）、PTH+ORC3（8只）。2药物干预：各组PTH均为100mg/kg/d，ORC低、中、高剂量分别为100mg/kg/d、300mg/kg/d、900mg/kg/d；NS组给以等剂量的生理盐水。以上均为灌胃给药，每天1次。3标本的制作及检测：用10%水合氯醛麻醉小鼠，仰卧固定，剪开胸腔，从心尖处插入圆头针，先灌流0.9%生理盐水冲洗，再灌注4%多聚甲醛磷酸缓冲液，同时从右心耳处剪开心脏放血。灌注完毕后立即断头，迅速取出大脑和小脑，放入4%多聚甲醛固定，常规梯度乙醇脱水，二甲苯透明，浸腊，包埋，选取小脑和海马连续冠状切片，片厚5μm。HE染色观察组织形态学改变，TUNEL法检测神经细胞凋亡情况，免疫组织化学法分析Bcl-2蛋白和Bax蛋白的表达。4统计学处理：应用SPSS13.0统计软件进行数据分析。多组间均数显著性检验应用方差分析One-WayANOVA，组间均数比较应用SNK检验，当P<0.05时认为差异具有统计学意义。结果:1HE染色结果NS组海马和小脑神经细胞均排列整齐，细胞结构清晰完整，胞浆红染胞核蓝染，偶见凋亡细胞。PHT组和PHT+ORC1组的海马、小脑均可见大量凋亡细胞，细胞排列紊乱，胞核固缩深染及周围空泡形成。PHT+ORC3组海马和小脑神经细胞均排列基本整齐，细胞凋亡程度较轻。PHT+ORC2组海马和小脑神经细胞凋亡情况均介于PHT+ORC1组与PHT+ORC3组之间。2TUNEL检测结果：NS组海马和小脑均可见少量凋亡细胞。PHT组和PHT+ORC1组的海马和小脑均可见大量凋亡细胞。PHT+ORC3组海马和小脑凋亡细胞均稀疏分布。PHT+ORC2组海马和小脑神经细胞凋亡情况均介于PHT+ORC1组和PHT+ORC3组之间。对各组海马和小脑神经细胞凋亡率进行统计学分析得出：与NS组相比，PHT组海马和小脑神经细胞凋亡率均升高，差异具有统计学意义（P<0.05）；PHT组与PHT+ORC1组两组间的海马和小脑神经细胞凋亡率差异均无有统计学意义（P>0.05）；与PHT组相比，PHT+ORC2组海马和小脑神经细胞凋亡率均降低，差异均具有统计学意义（P<0.05）；与PHT组相比，PHT+ORC3组海马和小脑神经细胞凋亡率均降低，差异均具有统计学意义（P<0.05）；PHT+ORC所有组中海马神经细胞凋亡率每两组之间相比差异均具有统计学意义（P<0.05）；PHT+ORC所有组中小脑神经细胞凋亡率每两组之间相比差异均具有统计学意义（P<0.05）。3Bcl-2表达结果：NS组海马和小脑均可见大量Bcl-2表达阳性细胞，胞浆呈棕黄色，染色较深。PHT组和PHT+ORC1组的海马和小脑均可见少量Bcl-2表达阳性细胞，阳性细胞散在分布且染色浅淡。PHT+ORC3组海马和小脑阳性细胞均分布尚密集。PHT+ORC2组海马和小脑阳性细胞表达情况均介于PHT+ORC1组和PHT+ORC3组之间。对各组海马和小脑Bcl-2表达阳性细胞AO值进行统计学分析得出：与NS组相比，PHT组海马和小脑表达阳性均降低，差异具有统计学意义（P<0.05）；PHT组与PHT+ORC1组两组间的海马和小脑表达阳性细胞差异均无有统计学意义（P>0.05）；与PHT组相比，PHT+ORC2组海马和小脑表达阳性细胞均增多，差异具有统计学意义（P<0.05）；与PHT组相比，PHT+ORC3组海马和小脑表达阳性细胞均增多，差异具有统计学意义（P<0.05）；PHT+ORC所有组中海马表达阳性细胞每两组之间相比差异均具有统计学意义（P<0.05）；PHT+ORC所有组中小脑表达阳性细胞每两组之间相比差异均具有统计学意义（P<0.05）。4Bax表达结果：NS组海马和小脑均可见少量Bax表达阳性细胞，阳性细胞散在分布且染色浅淡。PHT组和PHT+ORC1组的海马和小脑均可见大量表达阳性细胞，胞浆呈棕黄色，染色较深。PHT+ORC3组海马和小脑阳性细胞均分布稀疏。PHT+ORC2组海马和小脑阳性细胞表达情况均介于PHT+ORC1组和PHT+ORC3组之间。对各组海马和小脑Bax表达阳性细胞AO值进行统计学分析得出：与NS组相比，PHT组海马和小脑表达阳性均增多，差异具有统计学意义（P<0.05）；PHT组与PHT+ORC1组两组间的海马和小脑表达阳性细胞差异均无有统计学意义（P>0.05）；与PHT组相比，PHT+ORC2组海马和小脑表达阳性细胞均降低，差异具有统计学意义（P<0.05）；与PHT组相比，PHT+ORC3组海马和小脑表达阳性细胞均降低，差异具有统计学意义（P<0.05）；PHT+ORC所有组中海马表达阳性细胞每两组之间相比差异均具有统计学意义（P<0.05）；PHT+ORC所有组中小脑表达阳性细胞每两组之间相比差异均具有统计学意义（P<0.05）。结论：1治疗剂量PHT可引起成年小鼠海马、小脑神经细胞大量凋亡，Bcl-2蛋白表达减少，Bax蛋白表达增多。2PHT和ORC联合应用，常规口服剂量ORC可使PTH作用后的小鼠海马、小脑神经细胞Bcl-2蛋白表达增多、Bax蛋白表达减少，对细胞凋亡有抑制作用，且呈剂量依赖关系，剂量越高其抑制细胞凋亡作用越明显。3促使神经细胞凋亡是PHT造成神经系统不良反应的可能机制之一，ORC神经保护作用机制可能与抑制细胞凋亡有关。